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为什么要用不同的限制酶切割
...
酶切割
目的基因时候
需要使用
两种以上
不同的限制酶
进行切割?
答:
为了防止目的基因和运载体自身环化。为保证目的基因正序插入运载体,防止反向连接
。限制性核酸内切酶是
可以识别并附着特定的脱氧核苷酸序列
,并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶。
为什么要
两种酶才能
切割
基因(两端要
不同的限制酶
),不能是同一种吗?
答:
用不同限制酶切割的目的是:保证目的基因和质粒(运载体)的准确连接,避免无效连接过多
。可以用不同限制酶切割相同序列的原理:虽然一种限制酶只能识别一种特定的氨基酸序列,但两种限制酶识别的序列可以相包含,例:酶A识别GGATCC序列,酶B识别GATC序列,则GGATCC序列就可以被两种限制酶切割。同步双酶切 ...
...那
为什么
在剪切目的基因的时候同种序列
要用不同
种的内切酶
答:
用不同限制酶切割的目的是:保证目的基因和质粒(运载体)的准确连接
,避免无效连接(如:目的基因—目的基因连接物、质粒自身环化等)过多。可以用不同限制酶切割相同序列的原理:虽然一种限制酶只能识别一种特定的氨基酸序列,但两种限制酶识别的序列可以相包含,例:酶A识别GGATCC序列,酶B识别GATC序列...
为什么
基因工程中运载体要具有多个
限制酶
切点
答:
做为具有使用性的载体做为具有使用性的载体,一般最少有2个以上不同的限制性酶切位点,
这样能够保证需要插入片段的效率和插入的片段插入的方向性
。如果只有一个酶切位点,那在做连接反应时候载体自连现象会非常严重,同时插入片段有可能以2种相反方向插入载体,这样连接成功后还需要筛选方向正确的连接体...
构建重组载体时用两种
限制酶切割
目的基因的原因
答:
(3)用SalI和HindIII两种限制酶对质粒进行切割时,
会破会四环素抗性基因,但不会破坏氨苄青霉素抗性基因
,因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青霉素的培养基上能生存,但不能在含有四环素培养基上生存,所以培养基A和培养基B分别还含有氨苄青霉素、四环素,含目的基因的是4和6菌落中的细菌.探针是指用...
为什么不同的限制酶切割
基因 就可以避免自身与自身连接呢>?
答:
不同的限制酶切割
后产生的末端一般不同,而DNA分子要连接时,必须要求两个末端是相同的情况下才能连接。因此,不同的限制酶切割基因可以避免自连。
为什么用
两种
限制酶切
有两种
不同的
目的基因(产生两种
答:
所以,既
要用
两种不同
酶切
,还要保证质粒和目的基因一样的两种酶。两种
不同的限制性内切酶
识别并
切割
的序列是不同的,也就是两种酶分别切割了基因和载体时,产生了两个切口,这两个切口不是粘性末端,不能互补配对,所以不可能连接在一起,如果用一种酶来切那么这样基因中或者是载体上就会有相同的粘性末端...
为什么
可以
用不同的限制酶
来切目的基因和载体
答:
为什么
可以
用不同的限制酶
来切目的基因和载体?- - - 我们首先要明白
酶切
的目的是什么!其实就是把质粒切开一个缺口,好让目的基因进入!而采用不同限制酶的原因是:载体上可用到的位点较少,确定载体需要的位点之后,再观察目的基因,但是载体上可用的酶可能在目的基因内部有酶切位点。- - - - -...
为什么
可以
用不同的限制酶
来切目的基因和载体?例如用EcoR 1和Alu 1切...
答:
而
采用不同限制酶
的原因是:载体上可用到的位点较少,确定载体
需要的
位点之后,再观察目的基因,但是载体上可用的酶可能在目的基因内部有酶切位点,例如你举得例子,在目的基因内部具有SmaI的位点,因此不能用这个酶,这时我们可以寻找SmaI的同尾酶,这样就可以进行特异性
的酶切
与连接了,在例子中举例的...
为什么
把目的基因切下来只能
用限制酶
Ⅰ不能用 限制酶Ⅱ 这两种酶有什么...
答:
酶具有专一性,每种基因都有专一
的限制酶
。酶一酶二作用的目的基因
不同
。
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