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菌落pcr要用什么引物
菌落PCR
简介
答:
方向特异性引物:结合特异性与方向性
,适用于需要方向信息的平末端克隆。 PCR反应 - 以裂解菌液上清为模板,标准PCR反应设置,关键在于质粒DNA的释放和模板制备。 电泳分析 - 通过凝胶电泳解读产物大小,三种引物策略的预期结果各有不同。 接下来,让我们深入了解每个环节的技巧:PCR设置与模板处...
菌液
PCR
是阳性,却提不出来阳性质粒,求助
答:
建议:1.菌落PCR鉴定推荐使用通用引物
,因为不管是M13,RVM也好,这些东西从细菌里面扩东西出来的可能性是零,因为那些通用引物一般都不会是从细菌来的,像那几个T载体用的通用引物肯定不可能从细菌里面扩东西出来。2.一定要做阴性对照。希望能够帮到你 ...
请问一下,
什么
是菌液
pcr
?
答:
菌液
pcr
是指菌液的聚合酶链式反应,是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,
PCR的
最大特点是能将微量的DNA大幅增加。PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时
引物
与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合...
做
菌落PCR
时的上下游
引物
是谁的?是目的片段PCR是的上下游引物还是载体...
答:
都可以。
最排除背景的方法是用交叉引物做菌P
,也就是上游引物是载体引物,下游引物是目的基因下游引物,或者上游引物是目的基因上游引物,下游引物是载体下游引物,这样可以最大限度排除背景,只要能扩出来的基本上就可以肯定是重组子了
菌落pcr
检测阳性转化菌时为
什么
会出现假阳性
答:
因为你选择的引物不太合适,
最好用一个载体上的通用引物加一条目的基因的特异引物做菌落PCR
,这样会大大降低假阳性;如果你用目的基因本身引物做菌落PCR,挑菌时一定要小心不要沾到培养基(里面有大量的未连接的片段),然后PCR扩增的循环数要少(<25),做好阴性对照(在平板上没有斑的地方挑一下)...
请教:细菌16srDNA鉴定时
PCR通用引物
答:
细菌16srDNA鉴定时PCR
通用引物
首先你要提出细菌的DNA。方法如下:1、液体培养及保种:从斜面上挑取菌苔于液体培养基中放摇床上震荡(转速160r/min)培养16小时。吸取菌液于1.5ml的经过灭菌的EP管中,再加甘油(30-40%)进行保种。(-80摄氏度保藏2年)2、提取DNA(CTAB法):(1)取1.5ml菌液...
关于
菌落pcr
答:
1 如果你用了插入片断特异的
引物
扩增,那么可能是你连接时加的目的片断过多,菌表面粘附了目的片段(我曾经在没有斑的地方蘸一下,也能P出目的带),因此很可能出现假阳性。这样验证阳性克隆时建议你 1〉用插入片断两端的测序引物(如M13F+R),做个
PCR
,看能否扩出目的大小的带,如果有,说明肯定有...
做
菌落pcr
鉴定后放在室温内在做电泳会有影响么
答:
做
菌落pcr
鉴定后放在室温内在做电泳会有影响
菌落PCR
鉴定是T载体克隆连接后鉴定是否有阳性克隆(含插入片段)最方便快捷的方法.但是市面上能见到的菌落PCR鉴定试剂盒采用的都是T3,T7或者SP6等特异T载体
引物
,只能用于某种特定T载体连接阳性克隆的鉴定.如果
使用
不同T载体,便需同时购买多种鉴定试剂盒,大大...
菌落PCR
的具体方法
答:
1、
菌落PCR
混合液(通俗称为pcr mix)的制备Taq buffer(10×) 180uldNTP(2.5 mM) 20~25 ulPrimer Forward(
引物
浓度在10Pmol) 5 ulPrimer Reverse(引物浓度在10Pmol) 5 ulddH2O 720 ulTaq(2U/ul) 12~15 ul2、常温下随机挑选平板内的单一菌落,用灭菌的牙签或枪头挑取单一菌落(...
菌液或
菌落PCR
的反应体系怎么配置啊,同普通的PCR体系一样吗?用相同的...
答:
菌液PCR一般20ul体系加1ul
菌落PCR
建议先挑单克隆溶于10ul无菌水中,取一半作为模板扩增,另一半可以作为菌种保留,如果PCR鉴定正确,再拿出来接种摇菌。两种方法,在PCR程序上最好预变性时间长点,10min左右,或者先对细菌95度处理10min然后立即放到冰上进行预处理,以保证细菌中的质粒裂解释放。
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