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5race和3race的原理
你对应用
RACE
技术克隆cDNA的5末端
和3
末端
的原理
有怎样的了解?
答:
【答案】:(1)
5
'
RACE
①在反转录酶的作用下,以已知基因片段内部特异性引物启始cDNA第一条链的合成。②RNase混合物降解模板mRNA,纯化cDNA第一条链。③用末端转移酶在cDNA链3'端加入连续的dCTP,形成oligo dC尾巴。④以连有oligo dG的锚定引物和基因片段内部特异的nested引物进行PCR扩增,以期得到目的...
RACE是什么
技术?
答:
RACE技术的基本原理是通过已知mRNA序列的部分信息,设计特定的引物,利用PCR技术扩增mRNA的5'和3'端未知序列,从而获得全长cDNA序列
。这项技术由Frohman等人于1988年发明,并广泛应用于基因克隆和表达分析等领域。RACE技术主要分为两种类型:5'RACE和3'RACE。5'RACE用于扩增mRNA的5'端序列,而3'RACE则用...
基因克隆的方法主要有哪几种?简述各种方法
的原理
和用途。
答:
基本原理:根据已知序列设计基因片段内部特异引物,由该片段向外侧进行PCR扩增得到目的序列
。用于扩增5'端的方法称为5'RACE,用于扩增3'端的称为3'RACE。用途:是用于从已知cDNA片段扩增全长基因的方法。(2)应用cDNA差示分析法克隆基因 基本原理:该法充分发挥了PCR技术以指数形式扩增双链DNA模板的特性,...
RACE的原理
?
答:
RACE的原理
cDNA末端的快速扩增,其中包括3’
RACE和
5’RACE两部分.一.3’RACE的原理:在反转录酶的催化下,由mRNA反转录成cDNA,然后再用PCR扩增cDNA,oligo(dT)可作为反转录引物用于cDNA合成.其步骤如下:1.以目的为模板,使用进行反转录反应合成第一条.2.使用上游特异性引物
和3
’端进行反应.3...
cDNA全长扩增,
RACE
技术了解一下
答:
5
'
RACE
流程包括:反转录mRNA生成cDNA,然后在cDNA末端添加适配序列,利用模板转换技术进行PCR扩增。
3
' RACE则利用poly(A)尾作为锚点,同样进行反转录和PCR扩增。完整的RACE实验涉及RNA提取、已知序列设计、PCR扩增、产物处理和克隆测序等步骤。基因特异引物的设计至关重要,需考虑长度、GC含量、Tm值等因素...
基因克隆的方法主要有哪几种?简述各种方法
的原理
和用途。
答:
【答案】:(1)RACE技术:此方法通过设计基因片段内部的特定引物,利用PCR技术扩增已知序列两侧的未知区域,分为
5
'
RACE和3
'RACE。5'RACE用于获取基因的5'端,3'RACE用于获取3'端,旨在获得全长基因。(2)cDNA差示分析法:此法通过PCR技术特异性扩增目的基因片段,通过减少cDNA的复杂性并改变接头序列来...
生物实验中的
RACE是什么
技术?
答:
RACE
技术的基本
原理
是利用mRNA的
3
'端和
5
'端特有的结构特征,设计特定的引物与mRNA的末端序列进行杂交,并通过PCR扩增得到mRNA的全长序列。对于3'RACE,通常利用mRNA的3'端poly(A)尾巴作为杂交位点,设计带有oligo(dT)序列的引物与mRNA结合,然后进行反转录和PCR扩增。而对于5'RACE,则需要利用mRNA的5'...
单边PCR的概念
答:
5’
RACE的原理
5’
RACE与3
’ RACE略有不同。首先,引物多设计了一个用于逆转录的基因特异引物GSP-RT;其次,在酶促反应中增加了逆转录和加尾步骤,即先用GSP-RT逆转录 mRNA获得第一链(-)cDNA后, 用脱氧核糖核酸末端转移酶和dATP在cDNA5’ 端加poly(A)尾,再用锚定引物合成第二链(+)cDNA,接下来与3’ RACE...
如何设计
3
‘和
5
’
RACE的
引物?
答:
操作会容易一些。gastrodia(站内联系TA)和正常的引物设计一样,关键是Tm要高,提高扩增的特异性,如果你什么基础都没有的话,建议把invitrogen和Clontech的
RACE
kit说明书看一下zcqcau(站内联系TA)我也很是期待:):)小白3521(站内联系TA)我们用的是takara的试剂盒,也还可以 ...
试述
3RACE
技术
原理
和方法。
答:
如果已知目的mRNA的一片段链内短序列,据此或设计基因特异引物,用原先存在的poly(A)尾(
3
'末端)或附加的同聚尾(
5
'末端)互补的序列做末端引物,就可以获得从未知末端直到已知区域的部分cDNA序列。为获得3'末端cDNA克隆,mRNA反转录时需用杂合引物(QT)。QT由17个核苷酸长的olig(dT)及特定的35个核苷酸...
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