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cdna第二链的合成
RNA加A逆转录时,残留的DNA也会同时加A吗
答:
逆转录过程由逆转录酶催化,该酶也称RNA依赖性DNA聚合酶,即以RNA为模板催化DNA
链的合成
。按5'→3'方向,合成一条与RNA模板互补的
cDNA
单链,它与RNA模板形成RNA-cDNA杂交体。随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以
cDNA
为模板合成
第二
条DNA链。至此,完成由RNA指导的DNA合成过程。
逆转录-聚合酶
链
反应中
cDNA
产量的很低什么原因?
答:
可能的原因:1. RNA模板质量低。2. 对mRNA浓度估计过高。3. 反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足。4. 同位素磷32过期。5. 反应体积过大,不应超过50 μl。
分子生物学考试大纲
答:
cDNA文库的一般步骤包括:(1)载体DNA的制备(2)mRNA的制备(3)
cDNA的合成
(4)连接产生重组DNA(5)将重组DNA转入适当的宿主(6)筛选重组克隆(7)扩增和保存文库 3. PCR的原理。将含有待扩增DNA样品的反应混合物放置在高温环境下加热使DNA分子变性为两条单
链的
DNA分子(一般变性温度与时间为94℃ ,1分钟);然后降低反应...
DNA聚合酶有哪些活性?
答:
Klenow:片段的主要用途是:①:补平限制酶切割DNA后产生的3′凹端;②:用[superscript32superscriptP]dNTP对DNA片段的3′凹端进行末端标记;③在cDNA克隆中,用于
合成cDNA第二链
;④应用Sanger双脱氧链末端终止法进行DNA测序。除了以上作用外,KlenowDNA聚合酶在cDNA克隆中合成第二链,随机引物标记,应用...
cDNA
是不是DNA的复制品?
答:
cDNA 和DNA的关系:cDNA为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而
合成
,并且在合成单
链cDNA
后,在用碱...
PCR引物设计,如何进行编辑?
答:
如扩增编码区域,引物3′端不要终止于密码子的第3位,因密码子的第3位易发生简并,会影响扩增的特异性与效率。5.引物3′端不能选择A,最好选择T。引物3′端错配时,不同碱基引发效率存在着很大的差异,当末位的碱基为A时,即使在错配的情况下,也能有引发
链的合成
,而当末位链为T时,错配的...
如何用已有的
cDNA
,做出相应的蛋白质?请写出详细的操作步骤,谢谢_百度...
答:
可以利用基因工程技术进行蛋白质表达。一个完整的基因克隆过程可以用分、切、接、转、筛五字概括。分:即分离出感兴趣的外源基因---目的基因,其来源途径有:PCR技术,化学合成法,酶促
合成cDNA
,制备的基因组DNA。其中最常用的是PCR技术。由于外源DNA片段离开染色体是不能复制的,就需要将外源DNA连到复...
反转录PCR引物如何设计?已经得到
cDNA第
一
链
,引物设计是以cdna为模版,设...
答:
不,需要两条,因为随着你PCR的进行,另一条互补链会被引物扩增出来,因此你需要两条引物都加进去。
纯化的双
链cDNA
要比单
链的cDNA
更容易做RT-PCR吧?
答:
RNA提取不容易,得到的
cDNA
浓度也很低啊,你一纯化有可能都丢了。按照经典的做法,做完反转录后,直接做PCR吧。理论上讲当然是纯化一下的好了,可实验操作性不强。
cdna
是什么意思
答:
与平常我们所称谓的基因组DNA不同,
cDNA
没有内含子而只有外显子的序列。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而
合成
,并且在合成单...
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