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什么原因导致dna纯化失败
PCR扩增的常见问题
答:
引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR
失败
或扩增条带不 理想、容易弥散的常见
原因
。有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度高,一条浓度低,
造成
低效率的不对称扩增,对策为:①选定一个好的引物合成单 位。②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条...
DNA
RNA两类核酸在进行分离和
纯化
时,哪种难度更高,为
什么
?
答:
第二,在分离
纯化
的时候难度更高,因为第一眼上面存在着蛋白质分子。
DNA
拖尾现象是
什么原因
答:
原因
有以下:1、 可以考虑是不是样品不纯,目的产物与杂带相差不大,所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。2 、琼脂糖检测
DNA
一般去1~5微升原液,加2微升溴酚蓝便可,注意上样浓度;3、可能是原液浓度太大
造成的
;4、可能DNA已降解。5、在提取前...
质粒
DNA纯化
不连续梯度的实验方法
答:
本文详细描述了一种通过不连续梯度离心法
纯化
质粒
DNA
的实验方法。该方法利用不同浓度的CsCl溶液分层离心,加速了CsCl梯度的形成,使得离心时间缩短至6小时。以下是详细步骤:首先,配制125g的CsCl溶液(pH8.0),使其密度达到1.47g/ml。接着,将8ml的氯化铯溶液加入到Beckman Quick-Seal离心管中,作为...
我不懂PCR的意义?生物化学方面的词
答:
对于较短靶基因(长度为100~300bp时)可采用二温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸(此温度Taq
DNA
酶仍有较高的催化活性)。 ①变性温度与时间:变性温度低,解链不完全是
导致
PCR
失败
的最主要
原因
。一般情况下,93℃~94℃min足以使模板DNA变性,若低于93℃则...
用试剂盒抽提的质粒
dna
,还需要进一步
纯化
吗
答:
是否需要
纯化
,还需进一步检测才能确定 1、测浓度和纯度,是否达标 2、跑电泳看条带是否与测的数据相互印证 如果上述两点满足,就不需要纯化,否则需要进一步纯化。不过根据经验,一般都不需要,我们实验室用的是GNT系列的试剂盒,提取结果就直接进入下游实验了,效果挺稳定 ...
利用吸附柱
纯化DNA
的原理是
什么
?
答:
当低盐QBT溶液平衡
纯化
柱后,即可加样,用中等盐浓度的QC洗去RNA和其他杂质,最后用高盐浓度的QF将
DNA
洗脱下来。由于传统的离子交换范围仅在0.4 mol.L-1以内,使杂质和DNA 洗脱范围十分接近,难于达到满意的纯化效果.但该柱一经使用,6h后纯化效力即开始下降。估计可能得
原因
有二,一是树脂表面亲水性强...
简述如何通过分光光度法判断
DNA
的纯度。
答:
纯净的DNA制品的A260/A280为1.8。DNA样品A260/A280为1.8~2.0时,表明样品纯度已达到要求。DNA样品A260/A280比值低于1.6时,表明有蛋白质或苯酚污染,应用苯酚-氯仿抽提,乙醇沉淀,
纯化DNA
。DNA样品A260/A280比值高于2.0时,表明有RNA存在,可以考虑用RNA酶处理样品后,苯酚-氯仿抽提,除去RNA...
琼脂糖凝胶回收后
DNA
位置变了的
原因
答:
pcr产物经琼脂糖凝胶电泳
纯化
回收后,纯化产物再次跑电泳,有时会出现电泳位置在marker上的变化。1.可能是marker的问题,有时候marker就是不太准。2.pcr产物在琼脂糖电泳时,看上去是单一的条带,有时候其实是混杂的条带,所有切胶回收再跑电泳,有时候会出现杂带。另外,由于pcr产物带较宽,纯化后的...
需要大量
纯化
细胞表达的重组蛋白,但有
DNA
残余,怎么去除DNA影响
答:
加点核酸酶溶解掉核酸,我们实验室蛋白
纯化
都是用柱子纯化,没有用过滤的,而且过滤的话纯化效果应该很差,杂质太多
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