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简述逆转录PCR的原理及主要过程
逆转录
反应的目的
是什么
答:
逆转录的原理:逆转录具有较高的灵敏性、操作简单等优点,常用于基因定量分析、生物学检测等,此外常用逆转录PCR克隆目的基因。 本文
主要
讲述了
逆转录PCR的原理
、重要参数以及操作注意事项。cDNA的合成是RT-PCR 的重要环节。以mRNA为模板,在逆转录酶的催化下,随机引物或基因特异性引物的引导下合成互补的...
RT -
PCR
操作步骤
答:
在0.5ml微量离心管中,加入1-5μg总RNA,加入1μl Oligo(dT)12-18,混匀后70℃加热10分钟,立即放入冰浴中冷却。然后,加入
PCR
反应缓冲液、MgCl2、dNTPs、DTT等,42℃反应2-5分钟。加入Superscript II酶,在42℃下进行50分钟的
逆转录
反应,随后70℃处理终止反应。再加入RNase H处理,以消除RNA...
实验二 RT-
PCR
扩增GADPH
答:
实验二:RT-PCR扩增GAPDH的精密操作 RT-PCR,即
逆转录
聚合酶链反应,是分子生物学中不可或缺的工具,它能将RNA转化为cDNA,为基因扩增提供模板。这项技术的核心在于严谨的步骤和精准的试剂选择,下面我们将深入解析这一实验的各个环节。2.1 RT-
PCR原理
与关键步骤 首先,从组织或细胞中提取的总RNA或...
逆转录PCR的
逆转录PCR
答:
RT-
PCR的
关键步骤是在RNA的
反转录
,要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种,即鸟类成髓细胞性白细胞病毒(avian myeloblastosis virus,AMV)反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒(moloney murine leukemia virus,MMLV)反转录酶。在完成
逆转录过程
之后,通过PCR进行定量分析的时候...
rtqpcr
原理及
应用
答:
rtqpcr
原理及
应用如下:原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用
逆转录
酶
反转录
成cDNA。再以cDNA为模板进行
PCR
扩增,而获得目的基因或检测基因表达。该技术
主要
用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。RT- PCR(Reverse ...
RT-
PCR的原理
是什么?有何用途?
答:
由于
逆转录
反应使用了引物和模板,也是聚合酶链式扩增的(
PCR
是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写)故称为RT-PCR。再说其用途:我们提取的RNA
主要
是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的信使...
PCR的原理
答:
PCR技术通常有两种解读:一是
逆转录PCR
,二是实时PCR。首先,逆转录PCR是通过逆转录酶,一种能将RNA转化为DNA的酶,以mRNA为模板进行工作的。这个
过程
与中心法则的DNA-RNA-蛋白质顺序相反,因此被称为逆转录。它结合了引物和模板,与
PCR的
链式扩增反应
原理
相似,所以称为RT-PCR。这项技术的
主要
应用是...
保姆级别qRT-
PCR
从理论知识(△Ct,△△Ct,2^-△△Ct)到实践操作_百度知 ...
答:
深入探索:保姆级qRT-PCR:理论与实践的艺术 实时定量
反转录PCR
(qRT-PCR),如同科研领域的里程碑,它将PCR技术推向了一个全新的定量时代。通过引入特异性的寡核苷酸探针(qPCR探针),这项技术实现了对
PCR过程
中产物的实时监测与精确计数,使得基因表达分析、病原体检测等生物科学实验如虎添翼[1]。qRT-...
分不清反
转录和反转录PCR
,希望能人帮我解释一下
答:
反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA
的过程
,是DNA生物合成的一种特殊方式。又称为
逆转录PCR
。其
原理
是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性...
逆转录PCR
是一步完成的吗?还是先逆转录成cDNA,再加入Taq聚合酶进行PCR...
答:
由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“
逆转录
”,由依赖RNA的DNA聚合酶(逆转录酶)来完成。随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成,随每个循环倍增,即通常的
PCR
。原先的RNA模板被RNA酶 H降解,留下互补DNA。这里有个动画,不妨看看http://translate.google.com/translate...
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