第1个回答 2024-06-01
PCR扩增过程通常包含多个循环，每个循环分为三个步骤，旨在复制DNA片段。首先，进行热循环，将反应温度提升至93-98℃，这个高温条件会断裂DNA双链间的氢键，实现DNA的熔解。为了确保模板和引物完全分离，这个步骤通常在开始前加热1-2分钟，让DNA以单链状态存在。
接下来，温度下降至引物的结合温度，通常比引物熔点低5℃，这个过程被称为降温或接合。正确的温度至关重要，过高可能导致引物无法正确结合，过低则可能导致错误结合。这个阶段同样持续1-2分钟，新型的融合型核酸聚合酶在这一阶段可以更快，仅需5-10秒。
最后一个步骤是DNA的延长，由结合在模板上的引物开始，通过DNA聚合酶沿着DNA链合成互补链。这个过程的温度依赖于使用的聚合酶类型。传统的Taq酶可能需要约1分钟来合成1000bp的片段，而来自嗜热菌Thermus brockianus的Tbr酶速度更快，大约40秒，而融合型聚合酶的效率极高，可能只需15秒左右就能完成。