实验原理:
植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养，在培养过程中能够保持良好的分散状态。植物离体培养可产生愈伤组织。将疏松型的愈伤组织县浮在液体培养基中并在振荡条件下培养一段时间后，可形成分散县浮培养物。良好的县浮培养物应具备以下特征：（1）主要有单细胞和小细胞团组成；（2）细胞具有量盛的生长和分裂能力，增殖速度快；（3）大多数细胞在形态上应具有分生细胞的特征，它们多呈等径形，核一质比率大，胞质浓厚，无液胞化程度较低。
在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养，因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说，细胞在培养到第18～25d 时达到最大的密度，此时应进行第一次继代培养。在继代培养时，应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系，就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作，特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株，即可获得携带有目标基因的个体。
主要试剂:
B5培养基加上0.2mg NAA（naphthalene acetic acid）的液体培养基（取3.2g B5粉末培养基，蔗糖30g，200ul体积质量为1mg/ml的NAA贮备液，溶于约800ml蒸馏水中，置于磁力搅拌器上混合均匀，pH计测定pH 值，1mol/l KOH调节pH值至5.8，加蒸馏水定容至1L，铝箔纸封口后121℃灭菌20min，贮于4℃冰箱，接种前水浴或自然升至室温）。
主要装置:
1. 超净工作台
2. 高压灭菌锅
3. 旋转式摇床
4. 水浴锅
5. 倒置显微镜
6. 镊子
7. 酒精灯
8. 三角瓶
9. 移液器
10. pH计
11. 恒温培养室
12. 漏斗
13. 不锈钢筛
14. 血球计数板等
实验材料:
拟南芥愈伤组织
实验步骤:
1. 用镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织，放入三角瓶中并轻轻夹碎。每100ml三角瓶含灭过菌的培养基 10~15ml，每瓶接种1~1.5g愈伤组织，以保证最初培养物中有足够量的细胞。
2. 将已接种的三角置于旋转式摇床上。在100r/min，25~28℃条件下，进行振荡培养。
3. 经6~10天培养后，若细胞明显增殖，可向培养瓶中加新鲜培养基10ml，必要时，可用大口移液管将培养物分装成两瓶，继续培养。（若细胞无明显增殖，可能是起始材料不适当，应考虑用旺盛增殖期的愈伤组织重新接种）。可进行第一次继代培养。
4. 悬浮培养物的过滤：按“3”法继代培养几代后，培养液中应主要由单细胞和小细胞团（不多于20个细胞）组成。若仍含有效大的细胞团，可用适当孔径的金属网筛过滤，再将过滤后的县浮细胞继续培养。
5. 细胞计算。取一定体积的细胞县液，加入2倍体积的8%的三氧化铬（CrO3），置70℃水浴处理15min。冷却后，用移液管重复吹打细胞悬液，以使细胞充分分散，混匀后，取一滴县液置入血细胞计数板上计数。
6. 制作细胞生长曲线：为了解县浮培养细胞的生长动态，可用以下方法绘制生长曲线图：
1) 鲜重法（fresh weigh method）在转代培养的不同时间，取一定体积的悬浮培养物，离心收集后，称量细胞的鲜重，以鲜重为纵座标，培养时间为横座标，绘制鲜重增长曲线。
2) 干重法（dry weigh method ）可在称量鲜重之后，将细胞进行曲烘乾，再称量干重。以干重为纵座标，培养时间为横座标，绘制细胞干重生长曲线。
上述两种方法均需每隔2天取样一次，共取7次，每个样品重复三次，整个实验进行期间不再往培养瓶中换入新鲜培养液。
7. 细胞活力的检查。对于初学者，往往需要检测活细胞的比率。可在培养的不同阶段，吸取一滴细胞县液，放在载玻片上，滴一滴0。1%的酚藏花红溶液（用培养基配制）染色，在显微镜下观察。几活细胞均不著色，而死细胞则很快被染成红色。也可用0。1%荧光双醋酸酯溶液染色，凡活细胞将在紫外光诱发下显示蓝绝色荧光，有经验的操作者，则可根据细胞形态，胞质环流判别细胞的死活。
8. 细胞再生能力的鉴定：为了解悬浮培养细胞是否仍具有再生能力，可将培养细胞转移到琼脂固化的培养基上，使基再形成愈伤组织，进而在分化培养基上，诱导植株的分化。
注意事项:
1. 上述步骤均灭菌操作，培养基、用具、器皿等要高压灭菌后方可使用。
2. 如培养液混浊或呈现乳白色，表明已污染。
3. 每次继代培养时，应在倒置显微镜下观察培养物中各类细胞及其它残余物的情况以有意识地留下圆细胞，弃去长细胞。
胞间层。又称中胶层。位于两个相邻细胞之间，为两相邻细胞所共有的一层膜，主要成分为果胶质。有助于将相邻细胞粘连在一起，并可缓冲细胞间的挤压。 所以建议只用果胶酶处理掉胞间层就可以了（处理时间要适中，至于具体时间~我也不知道）。如果使用纤维素酶就会破坏细胞壁，得不到完整的植物细胞。 :baike.baidu./view/850627.htm
PS:最好问老师。
另外想请问一下愈伤组织如何悬浮培养成悬浮细胞？zouhongda(站内联络TA)II型例愈伤为胚性愈伤，松散，在其进行悬浮培养时，需要用果胶酶和纤维素酶去细胞壁后才能进行。菸草BY2细胞系是做为植物的一种悬浮培养的模式而存在的。做悬浮培养还是要看你的目的。如果是悬浮培养生产次生代谢产物的可以这样。不过之前再做完悬浮培养使其大量扩繁之后，还要分化成苗什么的，就要又回到半固体或者固体培养基上来，不过此时最大的困难就是，悬浮培养获得的细胞一般都是无细胞壁的，而转移到半固体和固体培养基上还能生长的关键就是能够恢复细胞壁的生长，此时我们一般都会多加入些肌醇。zouhongda(站内联络TA)刚才说的是愈伤的悬浮培养。你所说的情况也有，但我了解的一般都是取植物组织后，如叶片，用果胶酶，纤维素酶处理，去壁，形成原生质体，之后可以转一些你感兴趣的基因进去，做的是瞬时表达。
植物组织培养分为三种，液体、半固体、固体，针对不同目的，不同材料选用不同培养基，液体组要是大规模生产用，获得单个细胞;半固体而固体主要用于增殖，以及用于培养从液体里面获得的单个细胞，从而有道生长为愈伤组织。
避免污染，在超净台内操作，操作前半小时先进行紫外杀菌。
所有用品高温灭菌，或者进行70%酒精擦洗。。
培养过程中，每隔一段时间取出一部分细胞冷冻储存，以防污染后没有细胞可以用。
细胞密度 培养液的渗透势 pH值 温度
温度，PH，无菌环境，光照，植物激素的比例营养物质浓度等等
植物细胞固定化培养可以做成人工种子。人工种子便于运输，比第一代人工种子(试管苗)好运输。而且植物细胞培养基是固体培养基。而动物细胞培养需要更仔细，而且是液体培养基，动物细胞的代谢废物，会流到培养基中。需要定期跟更换培养液。麻烦
一般来说,细胞扩增一般用培养瓶（获得大量的细胞）；
而具体做实验室一般用孔板,可以一次做很多组试验.