曾有人说他活不过十三岁，只有皈依佛才能闯过这一劫。为了防止意外发生，他到了六岁的时候，父母便把他送到上海法藏寺拜兴慈法师为师，法号乘培。 1939年起，游本昌先后在上海、南京等地的国小读书，南京市考棚国小毕业后，曾就读于南京育群中学、商业职业学校、上海立信会计学校。1951年高中毕业，由南京市文联推荐加入南京文工团。1952年初随团调任上海华东人民艺术剧院演员，同年进入上海戏剧学院表演系学习。1956年毕业后，分配到中央实验话剧院任演员。1980年加入中国戏剧家协会。
游本昌1977年出演话剧《枫叶红了的时候》，饰演陆峥嵘。 1979年出演话剧《大风歌》饰演吕产。 1981年出演电视剧《孔乙己》，饰演孔乙己。 1984年与虞梦出演童话电影《“下次开船”港游记》，在该影片中饰演洋铁人。 1985年主演神话喜剧《济公》，在该剧中饰演助人为乐、劫富济贫的济公。 1988年与王鹰共同主演剧情片《姑苏一怪》，饰演叶天士。
游本昌1989年主演神话喜剧《济公活佛》，饰演济公。1995年主演刘国权导演的剧情片《冒牌皇帝》。 1998年主演电视剧《济公游记》，饰演济公。 2000年出演哑剧《游先生哑然一笑》。 2003年主演古装电视剧《清明酒家》，饰演苏师爷。 2004年与邬倩倩共同主演神话爱情电视剧《九尾狐与仙鹤》，饰演太白金星。 2005年与曹骏、焦恩俊出演古装神话电视剧《宝莲灯》，饰演太上老君。
2009年游本昌自导自演神话电视剧《了凡》，饰演云谷会禅师。 2010年与王紫伊主演悬疑电影《济公古刹风云》，饰演济公 ；随后与薛之谦出演励志片《一只狗的大学时光》，饰演三轮车大爷 ；同年，与杨紫琼出演动作片《剑雨》，饰演行痴禅师。 2011年与房祖名出演爱情片《李献计历险记》，饰演老李献计 ；同年，主演动作片《刀见笑》，饰演唐胖子。
2012年出演爱情片《画皮2》，饰演炼丹大师。 2013年与郭涛出演青春爱情片《致命闪玩》，饰演老绅士 ；随后与吴孟达出演剧情片《大片》，饰演病人 ；同年，与张智霖出演爱情片《白狐》，饰演沙夜大师。
秦翊；虞梦；沈春湘
剃度出家
2009年7月28日下午3点30分，游本昌在黑龙江省绥芬河市大光明寺剃度出家。
游本昌7月29日上午9点，他正式由畅怀法师受出家沙弥戒，并赐法名定畅。
恐怕很多人都是从“鞋儿破、帽儿破、身上的袈裟破”的济公一角开始认识游本昌的，殊不知，那个时候的他，已经52岁，在话剧舞台上创造了不少经典角色，尤其在《克里姆林宫的钟声》里成功地扮演了列宁，还参加了列宁诞辰九十周年纪念演出。从小就想拍电影的游本昌，从春晚到《济公》，两次跨界，才真正从舞台的四方天地走了出来，用他的话说，“一夜之间，超过了以前我所有的观众”。（CNTV评）
游本昌对于大多数观众来说，游本昌饰演的经典角色莫过于济公和尚了。哼一句“鞋儿破，帽儿破”，一个喜怒笑骂、惩恶扬善的济公形象就清晰地浮现在眼前。（中国台州网评）