第1个回答 推荐于2016-04-24
粪便样本中含有大量PCR抑制剂,尤其是腐殖酸,会直接导致提取的DNA不存,导致PCR失败。
如果是用于16s rDNA菌群测序,不同的DNA提取试剂盒影响也很大(可以参考文献:The Impact of Different DNA Extraction Kits and Laboratories upon the Assessment of Human Gut Microbiota Composition by 16S rRNA Gene Sequencing)。
根据我们的实际操作经验,粪便DNA提取主要问题在于去除腐殖酸,还有需要充分裂解,包括使用溶菌酶。建议使用常见的粪便DNA提取试剂盒比较稳妥。
还有PCR无法获得结果还可以通过稀释DNA的一定程度上提高成功率,原因还是通过稀释减少腐殖酸等抑制剂。
我们现在对于16s rDNA菌群测序的DNA的最低要求是总DNA量超过100ng,浓度不低于10ng/ul。最好有比较好的OD值。本回答被提问者采纳