第1个回答 2022-06-02
实验报告
摘要
将一抗（单链抗体）标记到 胶体金 ，将抗原固定到试纸条上，通过竞争法定性检测待测标本中的抗原。要求：检测灵敏度达到5μg/mL。
1 试剂和耗材
名称公司名称公司名称公司
A α2b注射液20μg/mL、金标抗体：单链抗体、质控线包被蛋白：标签抗体、检测线蛋白：抗原客户提供吸水纸、底板、玻纤（金标释放垫）、玻纤（样品层析垫）、硝酸纤维素膜Millipore胶体金溶液、封闭液、金复溶液南京钟鼎生物
2 主要实验仪器材料
仪器名称公司仪器名称公司
离心机：Mini-14k型杭州奥盛仪器有限公司喷点系统（划膜仪）：HM3030型、斩切机：ZQ2002 型上海金标
3 实验步骤
3.1 标记
取1支1.5mL离心管用超纯水清洗两遍，吸取1mL胶体金加入管中，向管中加入14μL0.2M碳酸钾后震荡离心管使其混合均匀，加入8μg单链抗体，混匀后反应20min。加入200μL10%BSA封闭反应20min。在11000r/min 转速下离心20min。弃去上清，用2mL 金复溶夜将沉淀复溶后铺在6mm×300mm的金垫上干燥。
3.2 点膜
将客户提供的抗原稀释至2mg/mL，用点膜仪喷点在NC膜上作为检测线，将客户提供的标签抗体稀释至0.6mg/mL，喷点在NC膜上作为质控线，55℃烘干箱干燥2h。
3.3 组装检测
在底板上从上到下依次粘贴吸水纸、NC膜、金垫（两层）、样品层析垫，用斩切机切成4mm宽的试纸条装入卡壳中用以检测。
3.4 金标抗体的验证及灵敏度测试
检测方法是用样品稀释液将A α2b注射液按照1:1的比例稀释，然后取稀释后的样品60μL滴于试纸条加样孔上，10min后判读结果。
图1 A α 2b不同浓度以及阴性对照结果
1：样品稀释液
2：0.5 μg/mL A α2b
3：2.5 μg/mL A α2b
图1左1试纸条CT线都比较明显，2号T线位置未完全抑制，3号基本完全抑制，试纸条检测重组人干扰素α 2b的灵敏度在5μg/mL左右。
3.5 加速稳定性实验
用以上方法制作的试纸条放入37℃环境下3天和7天后，再拿出来检测，结果如图2和图3。
图2 试纸条37℃3天检测结果
1：2.5 μg/mL A α 2b
2：0.5 μg/mL A α 2b
3：样品稀释液
图3 试纸条37℃7天检测结果
1：样品稀释液
2：0.5 μg/mL A α 2b
3：2.5 μg/mL A α 2b
图 2、3 中可以看出试纸条在 37℃下保存 7 天对检测性能没有太大影响。
4 结果讨论分析
经过以上实验，试纸条检测重组人干扰素α 2b注射液的灵敏度在5μg/mL左右，试纸条在4℃密封条件下能稳定保存 6个月左右。
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