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蛋白测纯度
为什么标准
蛋白质
必须用凯氏定氮法
测定纯度
答:
首先,因为
蛋白质
当中含有氮,而且因为氮的含量与蛋白质的含量几乎呈线形相关,所以标准蛋白质通常用凯氏定氮法
测定纯度
。生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义,如蛋白质的含氮量约为16%,测出含氮量则可推知蛋白含量。生物材料总氮量的测定,通常采用微量凯氏定氮法。凯氏定氮法由于...
为什么标准
蛋白质
必须用凯氏定氮法
测定纯度
答:
首先,因为
蛋白质
当中含有氮,而且因为氮的含量与蛋白质的含量几乎呈线形相关,所以标准蛋白质通常用凯氏定氮法
测定纯度
。生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义,如蛋白质的含氮量约为16%,测出含氮量则可推知蛋白含量。生物材料总氮量的测定,通常采用微量凯氏定氮法。凯氏定氮法由于...
蛋白质纯度
的
测定
方法有哪些?
答:
含量
测定
方法很多:凯氏定氮:灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2%,干扰少,费时8小时 双缩脲法(Biuret法):灵敏度低1~20mg,中速20~30分钟 紫外吸收法:较为灵敏50~100mg,快速5~10分钟 Folin-酚试剂法(Lowry法):灵敏度高 5mg,40~60分钟,操作要严格计时;颜色深浅随不同
蛋白质
...
鉴定
蛋白质
纯化产品的
纯度
,有哪些常用方法
答:
常用色谱法,通过标准品对照图谱进行,分析包括分子筛(大小)、亲和层析(特异性结合)、离子交换(带电性)、疏水(水溶性);或是沉淀法,包括等电点沉淀、差速离子心沉淀、盐析沉淀、亲和沉淀;透析超滤法;电泳法。这些法说不上常不常用 ,都是根据要分析的
蛋白
性质决定的。
如何利用SDS-PAGE判定
蛋白质
的
纯度
和分子量
答:
SDS-PAGE判定
蛋白质
的
纯度
:若该蛋白质是单肽链蛋白质,则电泳得到的只有一条蛋白带(两条色带:一条为溴酚蓝,一条为蛋白带);若得出多条电泳带,则应该用非SDS-PAGE进行电泳,得出单一蛋白带则为单一蛋白质 SDS-PAGE判定蛋白质的分子量:定义:R=de/do R为迁移率,de为蛋白质电泳迁移距离,do...
蛋白质纯度
鉴定最好的两种方法
答:
这一方法是目前灵敏度最高的
蛋白质测定
法。考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度...
...进行
蛋白质
的
纯度检测
及含量
测定
?或者测分子量?
答:
含量测定:用
蛋白质
标样配制一系列不同浓度的蛋白质溶液,绘制蛋白质浓度与峰高/峰面积相关的标准曲线,再在相同条件下测位置样品的峰高/峰面积,即可得未知样品的浓度;
纯度测定
:保证待测样品中所有组份均出峰的情况下,用目标蛋白的峰面积/峰高除以所有峰峰面积/峰高的总和即可的目标蛋白的纯度。
如何证明分离得到的
蛋白质
组分是纯的
答:
检测蛋白质纯度
一般是用SDS-PAGE 要证明是通过分离去掉杂带得到纯度高的目的蛋白也很容易,把分离前的样品,分离过程中分开的杂蛋白组分,目的蛋白组分都跑在同一张胶上。即可证明分离前有的杂蛋白已经在分离过程中被去除掉了,分离后的组分只有单一高纯度的目的蛋白。当SDS-PAGE同一泳道就一条目的蛋白条...
蛋白质纯度
鉴定的方法有哪些?
答:
电泳,蛋白质电泳 现在常用就是 SDS 聚丙乙烯酰胺凝胶电泳 特点 1)灵敏度高 2)
测定
快速、简便 3)干扰物质少 液相色谱 高效液相色谱是完全可以纯化蛋白质并且进行
蛋白质纯度
鉴定的 但建议还是使用蛋白质电泳 最主流 最有效的方法
为什么SDS-PAGE更适合
测蛋白质
的纯化和大小
答:
判定
蛋白质纯度
和大小的方法有很多种,主要是SDS-PAGE 和 HPLC:SDS-PAGE实验操作经典而又简单,结果判定也可以用marker进行判定。HPLC操作也可以用于分子量、纯度的检测,但是操作时间、分子量精确程度都不够理想。义翘5000多种蛋白都采用了SDS-PAGE进行分子量和纯度的鉴定,HPLC
纯度检测
也有相关数据。
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