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3730测序仪使用说明
ABI
3730 测序仪
,常见问题及解决办法?
答:
说明
1. 关於GC-rich特殊序列,因试剂及反应条件需特殊处理,成本较高。说明2. 96孔盘的检体若为PCR产物且需要
使用
酵素去除primer,每盘加收成本费1000元。说明3. 96孔盘可定序之检体总数为95个,需另加入一个标准反应。说明4. 已做好反应之96孔盘不限定检体数量,最多96个。定序结果以电脑档案...
有没有人知道ABI
3730测序仪
的测序原理
答:
就是用某种类似pcr产生的单链不同大小的dna在很长的毛细管里跑page胶,不同大小的单链dna上3’端有荧光,跑到发射激光的位置激光一打机器就看见荧光了,根据荧光不同来判断是什么碱基,大约能测到800bp左右
高通量
测序
原理(一)Sanger测序原理
答:
从ABI-
3730
和ABI-3500
测序仪
的诞生,到BigDye荧光标记试剂盒的出现,一代测序技术的金标准就此确立。双脱氧核苷酸(ddNTP)是Sanger测序的关键,它在DNA聚合过程中扮演独特角色。ddNTP的3'端缺失羟基,让DNA聚合酶在合成链时遇到阻碍,形成不同长度的终止片段,每个片段的3'端都有一个特定的双脱氧核苷酸...
3730测序仪
的测序结果中的高噪音影响是指什么?
答:
1、系统误差造成
,系统误差的噪音本身是很低的,如果是这种情况,那就说明信噪比的分母有关:有效信号太低;大多数与样品浓度低,或者样品与引物不匹配有关。总不可能无中生有吧?没有东西,总测不出有效信号吧?2、非目的片段测序信号造成:这种情况有高有低,算作与信噪比的分母有关。测序就是半个...
荧光标记自动
测序
技术
答:
目前, 应用最广泛的应用生物系统公司(appliedbiosystems, ABI)
3730
系列自动
测序仪
即是基于毛细管电泳和荧光标记技术的DNA测序仪。如ABI3730XL测序仪拥有96 道毛细管, 4 种双脱氧核苷酸的碱基分别用不同的荧光标记, 在通过毛细管时不同长度的DNA片段上的4种荧光基团被激光激发, 发出不同颜色的荧光, 被CCD...
怎么修改
测序
峰图
答:
一般
用
Analysisi 5.2修改,是ABI
3730仪器
自带的。客户看峰图一般用Chromas软件。
测序
公司发送的测序结果一般有一个峰图文件和一个序列文件,峰图文件为Abi格式,用chromas软件(网上可百度)打开。如下图四种颜色的波形代表四种碱基的信号强度,正常的峰图,波峰与波谷清晰,峰与峰之间的距离均匀。比较理想...
3730测序仪
怎么进行日常维护
答:
1.换胶。2、定期更换BUFFER.3、废液和水定期更换. 4、泵的清洗.
PCR产物是单带,切胶回收纯化后,
使用
ABI
3730
进行
测序
,为什么测序没有反应...
答:
说明
你回收的损失太大,浓度低自然测不出来。可以连T转化后再
用
小提质粒
测序
。
3730测序仪
怎么进行日常维护
答:
1.换胶.2、定期更换BUFFER.3、废液和水定期更换.4、泵的清洗.
DNA
测序仪
答:
(3) 在PCR仪上进行热变性(95℃ 2min),冰中骤冷,待上机。4.上机操作按
仪器
操作
说明书
安装毛细管,进行毛细管位置的校正,人工手动灌胶和建立运行的
测序
顺序文件。仪器将自动灌胶至毛细管,1.2kV预电泳5min,按编程次序自动进样,再预电泳(1.2kV,20min),在7.5kV下电泳2h。电泳结束后仪器会自动...
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