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简述碱裂解法提取质粒的原理
分子实验查漏补缺系列:SDS
碱裂解法
制备
质粒
DNA
答:
本文详细阐述了
碱裂解法
的操作步骤和
原理
,旨在帮助即使在使用试剂盒的情况下,研究者也能理解每个步骤的重要性,并对可能出现的问题进行思考和解决。II. 该实验旨在从约1至2毫升的细菌培养物中分离出质粒DNA。
提取
的DNA量大约在100纳克至5微克之间,这一量级取决于
质粒的
拷贝数。虽然这些DNA量对于体外...
用
碱裂解法提取质粒
DNA的,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
答:
溶液3是酸性钾盐溶液,其主要任务是中和碱性环境,同时沉淀出SDS。在这个过程中,除了SDS,蛋白和大段线性DNA也会被沉淀。这一步骤对于后续纯化
质粒
DNA至关重要。从历史角度看,
碱裂解法
已用于E.coli(大肠杆菌)质粒DNA的
提取
超过30年。在这个过程中,细胞被置于高pH强阴离子洗涤剂中,破坏细胞壁,让...
质粒的提取方法
答:
从具体操作方法分可以分为
碱裂解法
、煮沸法、牙签法等。在氢氧化钠(pH12.0-12.6碱性环境)和去污剂SDS的作用下,细菌蛋白质变性,细胞破裂,细菌染色体DNA变性,双链DNA氢键断裂,DNA双螺旋结构遭破坏而发生变形。但由于
质粒
DNA相对分子质量较小,公价闭环的DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态,呈环状超...
收到的
质粒
要
提取
吗
答:
该物质需要。质粒是独立于染色体外能够自我复制的环状DNA分子,需要提取后才可以使用。
质粒提取
采用的是强
碱裂解法
,基本
原理
是使用强离子洗涤剂将细胞壁破裂,进而使其分离。
质粒抽提的抽提方法
答:
关于
碱裂解法的原理
,复旦大学生化与分子生物学实验室的网站有一篇专论,大家可以去看一下。这是一篇美文,非常有趣。文中提到了一个与几乎所有能查到的资料不同的观点,也是非常有启发的。当然,碱裂解法也有缺陷:容易导致不可逆的变性;不适合大
质粒的抽提
。碱裂解法是很剧烈的方法,质粒在碱性条件...
碱裂解法提取质粒
三种溶液的作用
答:
2M的醋酸是为了中和NaOH。基因组DNA一旦发生断裂,只要是50-100kb大小的片断,就没有办法再被PDS共沉淀了,所以
碱
处理的时间要短,而且不得激烈振荡,不然最后得到的
质粒
上总会有大量的基因组DNA混入,琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。75%酒精主要是为了清洗盐份和抑制Dnase;同时溶液III的强...
分子实验查漏补缺系列:SDS
碱裂解法
制备
质粒
DNA
答:
很多年以来,
碱裂解法提取质粒
DNA一直是标准的方法。但现在因为有大量的
质粒提取
试剂盒,更方便快捷,研究人员也更喜欢用试剂盒来提取,但是试剂盒的最大问题在于试剂盒本身是一个黑盒子,只知道怎么用而不知道具体每个组分的作用。这样的研究人员缺乏对实验
原理
学习的兴趣,在出现问题之后也缺乏找到正确解决...
碱裂解法
大量
提取质粒是什么原理
?
答:
1、取培养至对数生长后期(一般培养12~16小时)的含待
提质粒的
细菌培养液于离心杯中,配平,4℃下4000rpm离心15min,弃上清,然后将离心管倒置于干净的约纸上使上清液全部流尽。2、向盛有细菌沉淀物的离心管中加入20mL冰冷的溶液Ⅰ,重悬沉淀(先加5mL溶液Ⅰ,用干净的玻璃棒搅拌均匀后,再加剩下的...
碱裂解法
制备
质粒
dna时,溶液1,2,3中各组分都起
什么
作用
答:
碱裂解法
制备
质粒
DNA时,溶液Ⅰ中的葡萄糖成分的主要作用是防止大肠杆菌沉淀,保持其悬浮状态。EDTA的作用是螯合钙离子和镁离子等二价金属离子,从而抑制DNase的活性。此外,可以添加RNase A来消化RNA。溶液Ⅱ是碱处理步骤的关键,其中NaOH的作用是溶解细胞,释放DNA。在强碱性条件下,细胞膜由双层结构转变...
为什么真核DNA无法用
碱裂解法提取
答:
因为真核细胞DNA上有蛋白质结合,如果用碱裂解法就会把DNA与蛋白质一起沉淀下去,无法分离出细胞核DNA!
碱裂解法提取质粒
DNA,
原理
是细胞内蛋白质在沉淀的过程中会把大的DNA分子一起沉淀下去,质粒DNA由于较小,不会被沉淀而进入上清液,因而可以通过离心将其分离出来!然而真核DNA与组蛋白紧密结合,无法...
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