SPA应用很广，但所有应用的原理都离不开SPA具有与IgG的Fc段的结合能力，主要应用方面如下： 1．SPA菌的协同凝集作用
用已知的标准血清，吸附到SPA菌的表面,使之成为吸附抗体的载体,再以此去诊断相应的未知抗原而产生肉眼可见的凝集颗粒,诊断的抗原可以是颗粒性的,也可以是可溶性的。此种凝集相当于反向间接血凝,但省去间接血凝中的抗体纯化,红血球鞣化等复杂手续,而只需要 SPA菌体及粗制免疫血清即可。所以此法简单、快速,特异性敏感性均较满意。目前已用于许多细胞和病毒的检测及分型。
协同凝集只适用于检测抗原，未见应用于检测抗体的报道。
2．作为广谱第二抗体 用SPA代替抗体IgG的第二抗体，有如下优点：①SPA制备容易，性质稳定，易纯化， 对人和多种哺乳动物的IgG都能应用,不受种属限制。而第二抗体的制备比较麻烦，且需多次免疫动物，在应用上要受同种属的限制；②SPA的结合力强，相当于游离抗体与抗原的结合力，对人和兔的亲和常数均为103 L/克分子，结合后对IgG的活性无影响。无论在0℃、37℃、44℃及56℃几乎均能立即结合而无需长时间的孵育，因此可以缩短试验时间，第二抗体在较长的孵育中，出现抗原分解的问题也可以得到解决；③SPA容易标上125 I、荧光素、辣根过氧化物酶、铁蛋白等，因此可与多种技术相结合；④在检查细胞上的病毒抗原时，第二抗体往往特异性不强，会非特异性地与细胞膜上的Fc受体结合。SPA分子高度均一，它不是免疫球蛋白，不受Fc受体影响，所以有较高的抗IgG特异性；⑤用第二抗体做免疫沉淀试验时，必须将抗免疫球蛋白的浓度调整至等价，才能产生最佳的沉淀作用。而用SPA菌沉淀，不受此限制，能保证彻底的沉淀；⑥SPA与lgG结合是可逆的，用4mol/L尿素、4mol/L硫氰酸、盐酸(pH2.5)或鸟嘌呤盐酸盐等都可以使之重新解离。
3．用于提取纯化IgG 利用SPA与IgG的结合特性提取IgG，比常规采用硫酸铵、Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度离心等法要简便得多，而且纯度好。
4．检测和提纯IgM IgM在病毒的早期诊断中具有重要意义，为了检测特异性IgM抗体，必须首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的办法，利用此法也为IgM的提纯开辟了道路。
5．其它方面 用于免疫复合物的检测、体外激活补体功能试验、细胞表面标记以及肿瘤表面抗原的检测等。
6、SPA在免疫细胞化学染色中的应用
SPA可为多种示踪物如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白等所标记，应用较广的为酶标记SPA和金标记SPA技术，后者将在第七章 中叙述。标记SPA常用的酶为HRP。可应用于间接法。SPA在PAP法中可代替桥抗体。 1.SPA—HRP用于间接法的操作步骤
(1)切片经脱蜡后用0.5%H2O2—纯甲醇液处理5min以抑制内源性过氧化物酶活性。
(2)用Tris盐酸缓冲液洗2次，每次3min。
(3)以第一抗体血清覆盖处理切片，37℃，孵育30min，或4℃24～48h。
(4)用Tris-HCl缓冲液洗3次，每次5min。
(5)加SPA-HRP处理30min。
(6)Tris-HCl缓冲液洗3次，每次5min。
(7)DAB-H2O2显色。
(8)复染、脱水、透明、封固。反应物为棕色。
2.SPA用于PAP法的操作步骤
(1)切片脱蜡至水洗。
(2)80%甲醇(含0.6%H2O2)封闭内源酶活性5min。
(3)10%卵白蛋白Tris缓冲液，20min。
(4)第一抗体作用37℃，30min或4℃ ，16～48h。
(5)0.05mol/l pH7.6 Tris-HCl缓冲盐液洗片5min。
(6)SPA(1μg/ml)5min。
(7)Tris-HCl盐液洗5min。
(8)PAP复合物(无种属限制)，5min。
(9)Tris-HCl盐液洗切片5min。
(10)DAB(0.6mg/ml)，加0.01%H2O2反应5min，然后水洗。
(11)复染：常用Mayer’s苏木精液数秒至1min，水洗。
(12)脱水、透明、封固、镜检。 3.SPA-HRP的制备 应用Nakane和Kawaoi1974年建立的过碘酸法，酶：SPA=2：1，即HRP10mg，SPA5mg。
(1)10mg 溶于新鲜配制的pH8.1、0.3mol/L碳酸氢钠溶液1ml，加入0.1ml 1%二硝基氟苯无水乙醇溶液以封闭酶分子中的氨基，使不发生酶的自身聚合，室温轻轻搅拌1h。
(2)加入1ml0.04～0.08mol/L的NaIO4，室温搅拌30min。
(3)加入1ml0.16mol/L乙二醇，室温轻搅1h。
(4)对1000ml 0.01mol/L pH95 碳酸盐缓冲液充分透析，换缓冲液3次。
(5)加入5mg SPA的0.1mol/l pH7.4碳酸钠缓冲液1ml，室温轻搅2～3h。
(6)加5mg硼氢化钠终止氧化，置4℃冰箱3h或过夜。
(7)对PBS透析24h，4℃离心去沉淀，半饱和硫酸铵洗沉淀结合物3次，溶于1ml 0.02mol/L pH7.4的PBS中。
(8)对PBS充分透析，经测定后分装，贮于-20℃冰箱中保存备用。
用过碘酸钠法可以得到很高标记率的HRP-SPA标记物，而且保存了抗体的全部活性，敏感度高，稳定性强，大大优于戊二醛标记抗体法，现在也有HRP-SPA的标记物供应，但要注意由于各家所用的SPA可能来源于不同菌株，在性质上可能存在一些差异。
