酶定量测定中要控制哪些条件?为什么?

Question

如题所述

Answer 1

酶量不能用重量或浓度表示，而用酶活力(单位)来表示。酶活力单位的定义是在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物的酶量定为一个单位。酶活力测定可以测定底物的单位时间消耗量，更常用的是产物的单位时间的产量，测定结果是否真实反映酶活力与测定时的酶促反应条件是否适宜有关。
①对pH的要求，同一种酶在不同的pH下测得的反应速度不同，最适pH时酶的活力最大。pH之所以影响酶活力是因为酶是蛋白质，过酸过碱都会使酶变性，pH既影响酶活性中心基团的解离状态，又影响底物的解离，从而影响催化活性，最适pH能保证酶本身的稳定性及催化活性。但酶的最适pH不是一个特征常数，它因不同的酶、底物、反应类型及缓冲液成分而不同。
②对温度的要求。酶对温度最敏感，但一般不在酶活性最大的最适温度下进行，这是因为测定酶活力需要一定时间，而在最适温度下，酶的稳定性差，很短时间内就会变性，因此，通常在20～50℃测定，且因酶的Q₁₀在1～2，每改变1，反应速度就差10%，所以应把温度控制在正负0.1℃的范围内。
③对底物浓度的要求，要求底物浓度大大超过酶浓度，使酶达到饱和从而达到最大速度。
④对酶浓度的要求，在测定酶活力时，要求酶浓度远小于底物浓度，从而保证酶促反应速度与酶浓度成正比，这是测定酶活力的依据。
⑤对反应时间则要求测定反应初速度，测定酶活力要求时间越短越好，一般反应恰当的程度是指底物浓度消耗不超过5%，以保证酶活力与速度成正比的直线关系。这是因为随时间的延长产物积累，加速了逆反应，酶活性稳定性下降，底物浓度降低。