[qPCR 专栏] 相对定量那些事儿（5）-内参基因的选择

Question

如题所述

Answer 1

在[qPCR 专栏]系列文章中，我们探讨了相对定量方法的应用，特别是在无需绝对定量时，它在分析样本间基因表达变化中的重要性。相对定量通过将样本的表达量与内参基因（如管家基因）进行比较，来衡量目的基因的相对表达水平。

内参基因的选择至关重要，它们通常作为稳定表达的参照，用来校正实验误差。这些基因如GAPDH、β-actin、18S rRNA等，尽管在细胞代谢中扮演关键角色，但它们的表达量受环境影响较小，能在多种组织中持续稳定。然而，每种基因都有其特性和局限性，例如GAPDH的糖酵解相关表达可能受增殖过程影响，β-actin的组织分布存在差异。

选择内参基因时，需要考虑实验目标和样本特性，参考文献或数据库如北京基因组所生命与健康大数据中心的资源。验证内参基因的稳定性通常通过工具如geNorm、BestKeeper等进行，通过比较多个候选基因的表达稳定性，Ct值的平均值和标准偏差，以确定最适合的内参基因用于后续实验。