测序技术的演变历程与核心原理</
自1977年Sanger测序技术的诞生以来，测序领域的革新已走过四十余载。这场科技盛宴的核心是测序原理的不断迭代，从精度与成本的权衡，到速度与深度的飞跃。最初的Sanger法以其惊人的精度（1977年，它揭示了首个基因组的秘密，尽管成本高昂</），奠定了基础。然而，第二代测序技术如454、HiSeq（以Illumina HiSeq为例，凭借全球市场份额的领先，其边合成边测序的策略，如文库构建和测序流动槽的应用，实现了成本大幅下降和速度提升）的出现，无疑是一次里程碑式的飞跃。
第二代测序的核心测序反应在flowcell中进行，DNA通过8个lane的接头随机附着，经过桥式PCR的扩增。NGS技术的亮点在于边合成边测序</，每次只加入一个dNTP，确保了准确的测序。Illumina测序技术如NovaSeq系列，以其高精度和快速性能而闻名。而第三代测序，如PacBio和Oxford Nanopore，以单分子测序为主，PacBio的SMRT技术平均读长可达10Kb-15Kb，通过荧光标记鉴别碱基类型，ZMW技术则用于区分信号和背景噪声。然而，这些技术并非完美：PacBio SMRT虽然能检测表观遗传修饰如甲基化，但速度较快，错误率相对较高（约10%-15%）；而MinION（Oxford Nanopore）的纳米孔测序则以实时读取和无PCR偏见为特点，尽管成本高昂，但其读长可达900kb，错误率约为5%-15%。
尽管第三代测序技术旨在弥补第二代的不足，如追求更长的读长和更低的错误率，但技术成熟度和成本仍是评价它们的关键因素。在衡量这些技术时，我们通常会关注成本效益、读长准确性、通量等关键指标。