阿帕克生物羊驼IgG1抗体研发平台介绍

Question

如题所述

Answer 1

✿ 引言 ✿

自1993年纳米抗体(VHH)的发现以来，它已在众多领域展现了令人瞩目的潜能，尤其是因其独特的特性，纳米抗体在疾病治疗领域展现出显著的优势。骆驼科动物的纳米抗体，尤其是常规抗体IgG1，由于其高达94%的人源化重链和91%的人源化轻链，同样具有巨大的治疗潜力，这在《骆驼科动物IgG1抗体的独特魅力》一文中得到了详尽阐述。阿帕克生物通过创新，已成功构建了羊驼单链抗体(ScFv)噬菌体展示技术平台，专注于开发这一骆驼科宝藏。接下来，让我们深入了解这一平台的运作过程。

✿ 免疫与基因获取 ✿

阿帕克生物选用1-1.5岁的健康且未经免疫的羊驼，采用重组抗原蛋白和过表达抗原细胞作为免疫原，进行四次免疫，每两次间隔21天，以确保免疫效果。免疫后，从免疫后50ml血液中分离PBMC，同时开展羊驼纳米抗体(VHH)和传统IgG1(ScFv Format)的并行开发。

✿ ScFv噬菌体展示文库构建 ✿

从PBMC中提取的RNA通过Trizol法纯化，确保RNA质量后，进行巢式PCR扩增，通过两轮反应获得羊驼重链(VH)和轻链(Vλ、VK)的高度特异性片段。通过Overlap-PCR技术，将这些片段连接，形成羊驼ScFv基因片段，并进行电转化，构建出羊驼ScFv噬菌体展示细菌文库，其插入率高达100%。

✿ 文库筛选与多样性分析 ✿

经过固相筛选和ELISA鉴定，羊驼ScFv噬菌体展示文库筛选出的阳性克隆显示85%的阳性率。测序结果显示，文库具有良好的多样性，可用于进一步的优化和开发。

✿ IgG1抗体表达与特性验证 ✿

筛选出的Ag ScFv-7和Ag ScFv-14被转化为人源化IgG1，其细胞结合活性得到验证，尤其是86.3%的重链人源化程度和84%的轻链人源化，证明了羊驼IgG1的可转化潜力。这些成果为抗体药物的研发提供了有力支持。

✿ 结论 ✿

骆驼科常规抗体IgG1的高人源化特性使得其在药物开发中具有独特优势。阿帕克生物的羊驼ScFv噬菌体展示平台，不仅降低了抗体药物的人源化难度，还通过一次免疫就可同时获取纳米抗体和IgG1，为抗体药物的快速开发提供了强大工具。在纳米抗体竞争激烈的市场中，骆驼科常规抗体IgG1无疑是一个值得考虑的新型选择。