微生物与免疫学表面抗原实验报告

Question

如题所述

Answer 1

细胞表面抗原检测实验
实验原理
用人结肠癌细胞为免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人结肠癌细胞表面抗原（Ag）的单克隆抗体 IgG（第一抗体），二者可以发生特异性的抗原抗体反应，形成抗原抗体复合物，再加入市售（也可自制）的荧光标记的羊抗鼠IgG抗体（第二抗体），可以与复合物进一步发生抗原抗体反应（二次抗体反应），这样就可以在光显微镜下观察到这种抗原在结肠癌细胞表面的存在。
实验材料
HeLa细胞
试剂/试剂盒
1640培养液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液体石蜡
仪器/耗材
盖片 载片 培养瓶 培养皿 滤纸 镊子 吸管 倒置显微镜 荧光显微镜 微量加样器
实验步骤
1. 将培养瓶中的结肠癌细胞接种到装有盖片的培养皿中，培养2~3天。

2. 在倒置镜下观察到盖片上的细胞生长状态良好后，在盖片左上角用玻璃笔做一下标记，以免在以后的操作中正反面颠倒。

3. 将盖片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分钟。

4. 用PBS洗三次，注意不要将PBS液直接倒在盖片的细胞面，以免引起细胞大量丢失。用滤纸片将盖片上的PBS轻轻吸干，不要损伤细胞层。

5. 将已稀释好的小鼠抗体滴在盖片上．每个盖片50 μl，37℃温育30分钟。

6. 用PBS洗三次，滤纸吸干。

7. 将已稀释好的荧光标记羊抗鼠二次抗体5μl滴加在盖片上，37℃温育30分钟。

8. 用PBS洗三次，滤纸吸干。

9. 将载片上滴一滴液体石蜡。然后将盖片细胞面朝下放到载玻片上，在荧光显微镜下观察。