生物问题:关于基因工程？

Question

生物问题:有的说法说基因工程中常使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，又有说法是获取目的基因和切割载体时使用同种限制酶目的是产生相同的黏性末端。
所以到底限制酶是常用同种还是不同种？？

Answer 1

两种说法都有道理，只是从不同的角度去说而已。

“用不同的限制酶切割目的基因和质粒”应理解为“用不同的限制酶切割目的基因，用不同的限制酶切割质粒”。比如用限制酶1和限制酶2切割目的基因，用限制酶1和限制酶2切割载体，“不同”就体现在“限制酶1和限制2”。

“获取目的基因和切割载体用同种限制酶”应理解为“切割目的基因的限制酶和切割载体的限制酶相同”，相同限制酶体现在切割目的基因和载体都用限制酶1和限制酶2。

具体分析如下：

要获取目的基因，要在目的基因的两端切割，两端分别有限制酶1和限制酶2的切点，那么我们用两种不同的限制酶切割，这样目的基因的两端就会有不同的末端，就不会出现目的基因的环化。

如果目的基因的两端都有限制酶1的切点，你可以只用一种限制酶1切割，这样目的基因两侧的末端相同，会出现目的基因环化（首尾连接），这不利于目的基因和运载体质粒结合。

如果你用限制酶1和限制酶2切割含有目的基因的DNA后，为了能让目的基因和质粒结合，你应该用同种限制酶切割质粒，也就是也用限制酶1和限制酶2切割质粒，这样质粒和目的基因就会有相同的末端，可以定向连接，不会出现环化的问题。

Answer 2

我不知道这是高中题还是大学题，暂且当做大学题了回答~

第一问的答案是“逆转录法”那酶切法可以吗？
不可以。获得cDNA的方法是，先提取细胞中的mRNA，然后逆转录成cDNA。由于真核DNA中有内含子，片段太大，表达困难，所以在获得该基因时，去除内含子，所以最好是mRNA逆转录而来的cDNA（不含内含子）。而且基因两端一般不会有合适的酶切位点给你酶切的。

第三问的答案是“启动子”那为什么不把终止子也写上去？
不需要加入终止子。首先反转录出来的cDNA自带有终止子，有些载体也自带终止子，即使没有终止子，关系也不大。
而基因在不同时空的特异性表达最主要的还是和启动子相关。表达外源基因时，必须构建相应的启动子，才能获得表达，不然也没用。本回答被网友采纳