酶活性测定与底物浓度无关介绍如下：
底物浓度对酶的活性不产生影响，只对酶促反应速率产生影响。随着底物浓度增加，酶促反应速率逐渐加快。达到某一值后不再随着浓度的增加而增加。但底物的物理状态可影响酶活性。比如将蛋白块切小，可增加和酶接触面积，从而使反应速率加快。
底物为参与生化反应的物质，可为化学元素、分子或化合物，作用可形成产物。一个生化反应的底物往往同时也是另一个化学反应的产物。而化学反应是化学学习的一个重要内容。物质间发生的化学反应往往错综复杂、变化万千。
不少化学反应是需要在一定条件下发生的，缺少了反应条件，有的反应是不能发生的，或进行得很慢。所以底物量的不同对反应结果有影响。
底物浓度的改变，对酶反应速度的影响比较复杂。在一定的酶浓度下当底物浓度较低时（底物浓度从0逐渐增高），反应速度与底物浓度的关系呈正比关系；随着底物浓度的增加，反应速度不再按正比升高；如果再继续加大底物浓度，反应速度却不再上升，趋向一个极限。
底物浓度的改变，对酶反应速度的影响比较复杂。在一定的酶浓度下当底物浓度较低时（底物浓度从0逐渐增高），反应速度与底物浓度的关系呈正比关系；随着底物浓度的增加，反应速度不再按正比升高；如果再继续加大底物浓度，反应速度却不再上升，趋向一个极限。
pH对酶促反应速度的影响酶反应介质的pH可影响酶分子，特别是活性中心上必需基团的解离程度和催化基团中质子供体或质子受体所需的离子化状态，也可影响底物和辅酶的解离程度，从而影响酶与底物的结合。
只有在特定的pH条件下，酶、底物和辅酶的解离情况，最适宜于它们互相结合，并发生催化作用，使酶促反应速度达最大值，这种pH值称为酶的最适pH。
胰蛋白酶大部分酶的活力受其环境pH的影响，在一定pH下，酶促反应具有最大速度，高于或低于此值，反应就会下降，通常称此pH为酶的最适pH。不同酶的最适pH不同。
例如：胃蛋白酶的最适pH为1.5~2.2，胰蛋白酶的最适pH为8.0~9.0，唾液淀粉酶的最适pH为6.8等。动物酶多在pH6.5~8.0之间，植物及微生物多在pH4.5~6.5之间，但也有例外。如：真菌的最适pH为5.0~6.0，多数细菌的最适为6.5~7.5，放线菌的最适在7.5~8.5。