western blot的原理,或者说蛋白免疫印迹的原理其实很简单,主要就是抗原和抗体结合的免疫学反应原理
首先采用SDS PAGE电泳,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离开蛋白质样品。接着转移到固相载体上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
接着就是抗原抗体的免疫学反应,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射显影出蛋白印迹来。其中第一抗体是和作为抗原的蛋白起免疫反应,结合后第二抗体再与此时作为抗原第一抗体起免疫反应。第二抗体上有同位素标记,可以被显色出来。
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