求助，怎么克隆一段未知序列的基因

如题所述

推荐答案 2018-07-05

如果时间允许就先分离纯化该酶蛋白，然后作质谱分析其C端和N端序列，然后据此设计引物，克隆分析。（转载，仅供参考）

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第1个回答 2017-01-27

通常的想法就是像你这么想的.
克隆出来基因序列并测序之后,通常先要鉴定这个序列是不是符合我们要求的,通常用生物信息学的方法,去ncbi做一个blastx,通过比对结果来判断这个序列是什么基因,此外,blastx结果会给出比对的方向,很容易就可以判定你测序的那条序列是正向的还是反向的,如果是反向的,那么就需要把它进行互补翻转,就得到了编码氨基酸的有义链了,许多软件都可以实现互补翻转的,如editseq,dnaman等.本回答被网友采纳

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关于 克隆的问题。假如我有有一个基因片段,未知序列。我可以把它连接...答：一种是末端带有A的典型的T载体，这样的T载体可以与taq酶扩增出来的片段连接，另一种是平末端的T载体，这种T载体末端没有A，它用于以pfu或者是phusion这样的高/超保真酶扩增出来的片段的连接，因为你的序列是未知的，为保万无一失，建议你最好先用taq给它处理下，即末端加A然后再和含有A的T载体连...

知道一个基因两端的序列,中间有一段未知,用哪种PCR法把未知片段扩增出来...答：中间有一段未知没有关系啊，从两头已知的里面设计引物，然后进行PCR，克隆到载体上，或者PCR产物直接送去测序，测序结果blast即可

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