酶联免疫法（ELISA）测胰岛素的具体步骤。

Question

如题所述

Answer 1

1.　包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度（5～20μg/ml）各0.3ml加于微反应板每个凹孔　　　　　　　　中,4℃过夜或37℃水浴2～3小时,贮存冰箱
2. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟
3. 加被检标本：每凹孔加入用含有0.05%吐温-20的稀释缓冲液稀释的被检血清各50μl，37℃，作　　　　　　　用1小时
4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml 后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl（TMB底物），再加入显色剂B 50μl（过氧化氢），轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟
10. 终止：每孔加终止液50μl（2M H2SO4），终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。