第1个回答 2020-06-03
黏附细胞线(细胞增殖培养)
的报道，出自Freshney,
R.I.
1994
年动物细胞培养:
基本的技术指南。
3rd
Ed.
Wiley-Liss.
纽约
美国
基本内容:
从培养容器去除培养基,
用PBS
漂洗,
将细胞置于胰蛋白中,
培养孵化,
然后增加含有血清的培养基，用于停止胰蛋白活动,
离解细胞,
稀释，最后放回到培养箱中培养。
1.
吸取除尽培养基和废弃物
2.
在10ml/75cm^2
的烧瓶中加入PBS，小心不要干扰单层细胞。柔和地晃动烧瓶，反复多次，用于漂洗单层细胞。然后去除PBS
废弃物。
3.
在3
ml/75cm^2的烧瓶中加入胰蛋白，并且晃动烧瓶,保证整个单层细胞都被胰蛋白被盖。
4.
继续培养，直到细胞开始分裂增殖,
通常3-5
分钟。应该注意避免留下暴露于胰蛋白的细胞。同时还应该注意不得使细胞被迫过早地分开,
否则会导致细胞聚集。
5.
在3-10
ml/75cm^2的
烧瓶中加入包含血清的培养基，并且上上下下吸取细胞溶液，直到细胞被分散成单细胞悬浮液。
6.
由血细胞计数计或犁刀进行播种，如果浓度过高，要进行适当的稀释。
7.
将细胞悬浮液加到适当的新的含有培养基的烧瓶中。
8.
将烧瓶放入孵培养箱里,
松开盖帽.
因为考虑到气体交换。
讨论
血清含有胰蛋白抗化剂。如此除去第
2
步骤的血清的痕迹是重要的。在第
5
步骤
培养基中的血清将会使剩余的胰蛋白钝化失活，从而避免细胞损害。如果使用一种无血清的培养基,
就必需使用一种供选择的胰蛋白抗化剂，如大豆胰蛋白抗化剂。细胞培养时期必需有适量的胰蛋白让细胞进入单细胞悬浮并且变化在细胞线之间。必要时调整这些叁数，使适合你的细胞。
第2个回答 2012-11-17
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