小麦醇溶蛋白的提取和鉴定分析方法

Question

如题所述

Answer 1

1、样品醇溶蛋白提取逐粒磨碎小麦种子样品，放入离心管
然后加入样品提取液，每管小麦加入0.5mL室温下将其浸提一夜加样前用5500r每min，离心15min。
2、安装制胶器。
3、灌制分离胶和插入样品梳吸取凝胶液20mL，放入烧杯；加入15μL10%APS和5μLTEMED，迅速摇匀。倒入凝胶玻板之间，马上插好样品梳。
4、加样小心平衡地拨出样品梳，然后用微量进样器吸取醇溶蛋白提取液。6-10ul。
5、电泳将电极缓冲液稀释10倍。取80mL电极缓冲原液，加无离子水稀释到800mL，分别注入前槽和后槽。正极接上槽短板，负极接下槽长板，打开电泳仪，调节电压为500V，开始电泳。醇蛋白电泳时间为甲基绿迁移时间的2~2.5倍。
6、固定和染色在固定和染色前，按每块胶板吸取3.5mL1.0%考马斯亮蓝液，再加上100ml10%三氯醋酸液，配成染色液。小心地剥下胶板，并切去胶板一小角以做左右标记，然后用无离子水漂洗后，浸入染色液染色1-2d。
7、电泳图谱鉴定真实性鉴定按电泳胶板蛋白质显色的蓝色谱带绘下电泳图谱，并计算出Rf值，与其品种的标准图谱比较，以鉴别品种的真伪。
8、品种纯度测定按品种标准图谱别出图谱不同的异品种种子粒数，计算出品种纯度百分率。