elisa法有哪几种类型及其原理

Question

如题所述

Answer 1

Elisa法有间接ELISA和直接ELISA两种类型。

其中，直接ELISA又分为竞争ELISA和非竞争ELISA两种。其原理均基于抗体与其对应的抗原之间的特异性结合，利用这一结合来检测样品中是否含有特定的抗原。以下是详细介绍：

一、间接ELISA

1.反应过程：先将被检测的抗原加到已涂有抗原的孔中，再加入未标记的特异性抗体与之结合，再加入与该次结合相应标记的二抗与上一步结合。

2.原理：在检测过程中，第一次特异性抗体与抗原结合生成免疫复合物，随后加入待检测物质，其抗原结合剩余的空位，再加入第二抗体，二抗与第一次抗体产生的免疫复合物进行结合。

二、非竞争ELISA

1.反应过程：首先，在已经涂有抗原的孔板上加入待测的标本及一定量的酶标记抗体（例如辣根过氧化物酶标记抗体HRP），待测标本与孔中存在的抗原发生特异性反应形成抗原抗体复合物，此时酶标记抗体与复合物发生反应，余下的两种非结合状态被洗掉后再倒入颜色原液（如TMB）加速发色。

2.原理：测定样品中特定分子含量的方法。标记的抗体对于待分析化合物极为特异，混合了待检测的样品后，抗体就会挑选出待测分子，从而获得分子的半定量信息。

三、竞争ELISA

1.反应过程：竞争ELISA先将受试物和固相相应抗体预先结合，再加入试样，与固相抗体竞争，并排开式吸附于固相抗体，结合非酶标抗体的辣根过氧化物酶HRP再次孵育，最后进行洗涤与溶胀反应。

2.原理：根据待测物和内部参比物竞争抗体上的空间亲和力大小使得不同的化合物具有不同的结合力，利用这一特性来进行分析或检测的方法。被抗体固定在孔板中，样品中的待检测物在抗体的作用下结合到固相上。随后加入标记的待检测物和特异性未标记的二抗与前面的待检测物竞争结合。用酶标仪读出吸光度数据得到待检测物含量。