博凌科为的病毒RNA快速提取试剂盒如何使用？得到的实验结果如何？求介绍

Question

如题所述

Answer 1

博凌科为的病毒RNA快速提取试剂盒采用特异性结合病毒RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA的提取要求， 如病毒RNA：HCV（丙肝病毒）,HIV（艾滋病毒）,和HTLV（人类嗜T淋巴细胞病毒）；等等。病毒裂解后，RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR/RT-PCR等分析。

操作步骤：
提示：第一次使用前请先在 10ml 漂洗液 RW 中加入 40ml 无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1. 200μl 血清等体液（需回复到室 温， 不足可用 0.9% NaCl 或者 PBS 补足）转入上述 1.5ml 离心管，加入 400μl 裂解液 RLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。
2. 室温(15-25℃)放置 10 分钟，每隔 5 分钟，振荡混匀一次。
3. 加入 450μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于 25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入 。
4. 将上述 混合物 加入一个 吸附柱 RA 中，（吸 附柱放入 收集管 中）13,000rpm 离心30-60 秒，倒掉收集管中的废液。
如果总体积超过 750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱 RA 中。
5、加 500μl 去蛋白液 RE，12,000rpm 离心 30 秒，弃废液。
6、加入 500μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心 30 秒，弃废液，加入 500μl 漂洗液 RW，重复一遍。
7、将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8.取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 的离心管中 ，在吸附膜的中间部位加 30-50μlRNase free H20（ 事先在 65－70℃ 水浴中 加热效 果更好 ）， 室温 放置 1 分钟，12,000rpm 离心 1 分钟。如果想得到较多量的 RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm 离心 1 分钟。
洗脱体积越大 ，洗脱效率越高。如果需 要 RNA 浓度较高，可以 适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于 200μl，体积过小降低洗脱效率，减少 RNA 产量。
9.RNA 病毒建议最好立刻使用，否则立刻短期放置在-70℃备用。