回答微生物培养与基因工程相关问题．Ⅰ、下列实验设计摸拟了巴斯德的曲颈瓶实验：把大豆加水煮烂，用两层

Question

回答微生物培养与基因工程相关问题．Ⅰ、下列实验设计摸拟了巴斯德的曲颈瓶实验：把大豆加水煮烂，用两层纱布滤取豆汤备用；如图1所示，在三角瓶里注入50mL豆汤，用装有S型弯玻璃管的药棉塞住瓶口；再把三角瓶放入盛水的锅里隔水加热，使锅里的水沸腾5min；取出三角瓶冷却后放在温暖的阴暗处（日平均温度在20℃以上）；逐天观察．（1）请为本实验设计对照组：______．（2）如图2所示装置中的豆汤在7天后开始腐败．原因是______．（3）从腐败豆汤中取培养液分离培养某细菌，在105稀释度下涂布0.1mL的菌悬液，3个平板上菌落数的平均值是56，则原培养液中的细菌数目是______个/毫升．Ⅱ、生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M（单细胞）产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如图3所示）．（4）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供______，培养基灭菌采用的最适方法是______法．（5）如图3所示是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图．则获得图A效果的接种方法是______，图B效果的接种方法是______．

Answer 1

（1）大豆加水煮烂时会杀死其中的微生物，探究实验需要遵循对照原则，该实验的实验组采用了加水煮熟的豆汤，则对照组应用未隔水加热的豆汤进行相同实验．
（2）由于少数细菌可能通过棉塞进入三角瓶，同时灭菌时未被杀死的芽孢开始繁殖，因此如图2所示装置中的豆汤在7天后开始腐败．
（3）菌落数的平均值是56，稀释倍数10⁵，所用稀释液的体积为0.1ml，则菌落数=（56÷0.1）×l0⁵=5.3×10⁷ 个．
（4）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供碳源；培养基灭菌采用的最适方法是高压蒸汽灭菌法．
（5）接种微生物常用的方法是稀释涂布平板法和平板划线法，获得图A效果的接种方法是稀释涂布平板法，图B效果的接种方法是平板划线法．
故答案为：
（1）用未隔水加热的豆汤进行相同实验，一段时间后去除曲颈进行相同实验
（2）少数细菌可能通过棉塞进入三角瓶，同时灭菌时未被杀死的芽孢开始繁殖
（3）5.6×10⁷
（4）碳源    高压蒸汽灭菌
（5）稀释涂布平板法    平板划线法