生化实验中的核酸大实验中的DNA和RNA提取和测定的一些问题

Question

我们做的是鸡肝，正常情况下，DNA和RNA测出来的含量是多少啊？
还有一些思考题：1.除去脂质的操作中，乙醇，氯仿-甲醇，乙醚的加入顺序可以改变吗，原因。
2.RNA碱水解后，加入6mol/L和0.1mol/L的盐酸的作用分别是什么？
3.为什么要将分离后的RNA上清液稀释？
特别是第一个问题，想知道的详细点，谢谢！

Answer 1

这样的如果你取样大概5mg，正常情况下，得出的DNA的产量大概400-600ng/ul（除非实验失败）。我一直用河南惠尔纳米科技的磁珠法核酸提取，方便快捷，简单迅速，效果很好，提取量也比较多。
第一个问题：核酸不溶于乙醇，所以可以使用乙醇对核酸进行漂洗，使残留的杂质溶解于乙醇，并最终通过离心去除。可总结为去除DNA中的残留杂质（对混杂的RNA无效）。如果你不用乙醇，会有很多杂质：盐、糖、蛋白等。
酚：使蛋白质变性溶解，抑制DNase的降解作用
氯仿：加速有机相与水相分层，去除核酸溶液中残余的酚
异戊醇：降低表面张力，减少气泡产生，使离心后的水相、变性蛋白相及有机溶剂相维持稳定
第二个问题：rna水解后，加盐酸可以和RNA水解后的核糖反应，生产一种化合物，这种化合物在670nm处有最大吸收峰，其吸收值和浓度成正比。加盐酸的作用就是为了定量。
第三个问题：取rna上清液稀释，应该也是便于测定吧。详情可以咨询河南惠尔的狄老师

Answer 2

我带过本科生的生化实验，但是我们用的是菜花提的DNA。你这个要是有步骤地话，看看还好说，不然有点不明所以啊。

Answer 3

学霸，咱们做朋友吧追问

我是想知道答案。。。

追答

额，虽然我有这个实验吧，但学渣不会啊，