中国兰花的组织培养和快速繁殖技术

Question

如题所述

Answer 1

中国兰花又名东方兰花，是兰科陆生兰类植物，是一个庞大的兰科植物家族中特有的珍稀物种。它是我国传统名花，花美、香淡雅，具有很高的观赏和经济价值，其中珍品众多，千金难求。而传统的分株繁殖，繁殖系数极低，带毒株数量大，物种退化。种子缺少胚乳和子叶，胚发育不完全，常规播种很难发芽。应用组织培养技术和快速繁殖技术是发展和壮大中国兰花产业的有效途径。1.中国兰花茎尖和侧芽的组织培养技术取样、消毒和接种为了最大限度地减少样品兰花携带的病菌，应采取特殊的管理措施，如将其置于透光的遮蔽物中，不施有机肥，新芽初出时将嫩芽暴露于土壤表面。切下6~13cm的芽苗，用锋利的刀片除去2~3片根部、污物和包裹的叶子，并彻底洗净。从材料上切下2~3cm的茎顶端，在10%的次氯酸钠溶液中灭菌10分钟。如果细菌严重，用0.1%氯化汞和饱和漂白粉上清液交叉灭菌。灭菌后用无菌水冲洗数次，然后放在灭菌的滤纸上吸干水分，再在解剖显微镜下剥离茎尖和腋芽。出于去除病毒的目的，茎尖应在0.2mm以下，否则2mm以上的茎尖可用两个袁烨基部剥离，有利于成活。原球茎诱导茎尖的诱导率和成功率高于侧芽。选择新芽长度的最佳方法是选择9~13cm长的新芽，无论是茎尖还是侧芽。芽的诱导成功率最高。培养基的选择因品种而异。对于兰花品种，白1毫克/升6苄基腺嘌呤5毫克/升NAA8.5%椰奶；或B111mg/L6苄基腺嘌呤2mg/L萘乙酸。对于“夏回”和“秋酥”，MS0.5mg/L6苄基腺嘌呤1mg/LNAA0.5%活性炭培养基效果最好。接种后，兰花外植体在23~25的黑暗中培养。1~2个月后，它们可以分化成一个或几个乳白色的原球茎。解剖显微镜下观察到桑葚状的原球茎，然后变成绿色。培养后，它们成为根茎。中国兰花经原球茎诱导启动后易褐化死亡，死亡率有时高达3/4。因此，采取接种大块外植体、降低培养温度、采用暗培养、减少创面、添加褐变抑制剂等综合措施。)在培养基中或使用活性炭应采取减少褐变的不利影响。接种3~6个月后，原球茎的茎尖和侧芽可在根茎形成时进行分裂和继代培养。白色或B11为增殖的基本培养基，以添加萘乙酸的1~2mg/L液体培养基为宜。放在慢转床上光照培养，每15天换一次培养基，连续继代培养3~4次，再转到相同成分的固体培养基上，添加活性炭和柠檬酸，每月继代培养一次。液体培养和固体培养交替进行。增殖时原球茎的分裂不能太小，培养组不能太小，培养液不能太多，继代培养时间不能太长。否则原球茎就长不好，甚至死亡。育苗和壮苗培养。将原球茎转移到含B523mg/L6苄基腺嘌呤0.2mg/L萘乙酸的琼脂培养基上，置于25左右，光照强度为1000L，芽和根能很快分化，形成完整的小植株。当幼苗长到2~3cm时，应及时转移到B52mg/LNAA0.3%活性炭培养基上，使根和芽按比例正常生长。大试管适合壮苗培养，要放在28左右，光照强度2,000le，每天光照12小时。当苗高超过12厘米时


种子的消毒和预处理：取8~9年生的研磨兰花蒴果，用酒精棉擦去果表面的污垢，用消毒刀片将蒴果切开，取出种子，用细白布包裹。用无菌水浸泡使其膨胀，然后用无菌滤纸吸去多余水分，用0.1mol/L氢氧化钾溶液预处理5~10分钟，用无菌水冲洗3次。无菌滤纸吸水后，放入饱和漂白粉上清液中消毒10分钟。氯化汞、次氯酸钠和漂白粉对种子表面消毒的效果优于双氧水。氯化汞对原球茎生长有不利影响，次氯酸钠和漂白粉能明显促进种子萌发和原球茎生长。播种常用的培养基有Knudson、VacinWent、White、B11等。B11或白色1mg/l6苄基腺嘌呤1mg/l萘乙酸0.3%活性炭培养基是紫茎泽兰种子的最佳培养基。杂交种子的最佳培养基是B111mg/L6苄基腺嘌呤1mg/L萘乙酸。萘乙酸能提高兰花种子的发芽率，但发芽后死亡数量增加。如果与6苄基腺嘌呤联合使用，效果更佳。添加活性炭还可以大大降低发芽种子的死亡率，特别是提高陆生兰花的发芽率。而活性炭对陆生兰花气生兰花杂交种子的萌发有明显的抑制作用。原球茎培养的兰花种子，无菌培养，萌发成白色原球茎，再发育成绿色原球茎。原球茎培养在25左右弱光的地方，如果转移到白色2mg/LNAA5%椰奶0.2%活性炭的培养基中，可以大量增殖。B52.5mg/L6苄基腺嘌呤0.2mg/L萘乙酸是成熟壮苗根芽分化的最佳培养基。B5是壮苗的最佳培养基。试管苗的移栽和养护。兰花试管苗“自力更生”的能力差，移植困难。成功移栽和养护的关键技术是：打开试管塞，炼苗3-4天，取出幼苗，清洗粘在根部的培养基，最大限度地减少根系伤害。幼苗晾干后，种植在通风、透水、保湿的介质中。高温弱光缓苗6-10天，然后保持在15-25，空气相对湿度80%左右，注意定期补充营养液。