选择一种蛋白测定方法时,需要考虑两个重要因素:缓冲液的化学组成和检测的蛋白量。基于dford方法的Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定灵敏度高,可以兼容糖、巯基乙醇、DTT等。而对于去污剂和NaOH这两种干扰Bradford测定的物质,DC蛋白测定却可以兼容。
如果蛋白是在loading buffer中,准备跑1D或2D电泳,或者刚从细胞裂解液中抽提出来,需要定量,那么RC DC蛋白测定更合适。
扩展资料:
常见测试方法:
Quick Start Bradford 蛋白测定是一种简单、精确的蛋白浓度定量方法。现成的1倍浓度染料和7 个预稀释浓度(0.125、0.25、0.5、 0.75、1.0、1.5、2.0 mg/ml)的蛋白标准品,让你拥有现成的检测工具。无需稀释标准品和染料,一步完成蛋白浓度定量。
Bio–Rad 蛋白测定 也是一种简单的蛋白浓度测定方法。该方法适应标准浓度测定、低浓度微量测定,或96孔微孔板的快速测定。它的基本原理和流程和上面的Quick Start Bradford都是一样的,不过要麻烦一点点。因为除了要稀释蛋白标准品,配成几个不同浓度之外,还要稀释染料,再过滤除去不溶颗粒。
Quick Start Bradford 和Bio–Rad 蛋白测定方法的起源都是Bradford染料结合方法 (Bradford 1976),该方法检测考马斯亮蓝G–250染料与蛋白结合时(主要结合碱性或芳香族氨基酸残基)的颜色变化。这种测定方法能定量多数蛋白或多肽(分子 量> 3,000–5,000 Da),操作简单、速度快,灵敏度高,与一些还原剂(如DTT、巯基乙醇)兼容。
DC (Detergent Compatible) 蛋白测定 是一种适用于含有去垢剂的蛋白样品比色测定方法。该方法类似于常规的Lowry 测定方法 (Lowry et al.1951),但经过改良,节省了操作时间。DC 蛋白测定只需要15分钟的温育过程,而且吸光值读数能保持2小时的稳定。
RC DC (Reducing agent Compatible & Detergent Compatible) 蛋白测 定是一种适用于含还原剂和去垢剂的蛋白样品比色测定方法。
以 Lowry 方法(Lowry et al.1951)为基础的 RC DC 蛋白测定,具有原来DC蛋白测定的特点,并能与更多的试剂兼容,简化了复杂蛋白样品溶液的定量测定。吸光值至少稳定1小时。
除了与DC 蛋白测定兼容的试剂外,RC DC 蛋白测定还与以下试剂和缓冲液兼容:2% CHAPS、350 mM DTT、0.1M EDTA 、Laemmli 缓冲液、10% beta-巯基乙醇、ReadyPrep 抽提试剂等。
参考资料来源:百度百科--BCA蛋白浓度检测