22问答网
所有问题
当前搜索:
使用什么法合成cdna
求教
cDNA
制备的一般
方法
RT,一般的步骤就行,
答:
1、oligo(dT)引导的DNA合成法:利用真核mRNA分子所具有的poly(A)尾巴的特性
,加入oligo(dT)短片段,由反转录酶合成cDNA的第一链.2、随机引物引导的cDNA合成法 (randomly primed cDNA synthesis) :根据许多可能的序列,合成出6-10个核苷酸长的寡核苷酸短片段(混合物),作为合成第一链cDNA的引物.在应用这...
基因工程
答:
逆转录-聚合酶反应法.该方法是mRNA经逆转录合成cDNA第一链
,不需再合成第二链,而是在特异引物的协助下,用PCR法进行扩增,特异地合成目的cDNA链,用于重组,克隆.
cdna
第二条链的
合成方法
优缺点比较
答:
末端转移酶加尾法,用RNaseH、DNA聚合酶与连接酶合成法
。1、末端转移酶加尾法:优点为避免购买昂贵的第二链合成试剂盒,更容易在CDNA两端引入不同的已知序列,不会出现两种引物的交叉污染,而缺点为末端转移酶加尾法无法满足任何需求,最佳的策略是根据研究材料和研究问题的特点,结合自己的实际情况,选择...
如何获得
cDNA
?需要
哪些
步骤?
答:
1.用亲和层析法得到 mRNA 后
,根据 mRNA 分子的 3' 端有 poly (A) 尾结构的原理,用 12~20 个核苷酸长的 oligo 与纯化的 mRNA 混合, oligo ( dT )会与 poly (A) 结合作为反转录酶的引物,随机引物法合成的产物也是 RNA-DNA 的杂交体。把 cDNA 克隆到载体中之前,必须把这种杂交体中的...
两种引导
cDNA合成方法
的优缺点是
什么
?
答:
在构建cDNA文库的过程中,
一种常用的方法是oligo(dT)引导的DNA合成:oligo
(dT)引导策略: 利用真核mRNA分子尾端普遍存在的poly(A)序列,通过添加含有12-20个脱氧胸腺嘧啶核苷酸的oligo(dT)短片段,反转录酶能够启动cDNA的第一链合成。然而,这种方法存在局限性:由于反转录酶只能从mRNA分子的3'末端开始...
cDNA
构建
答:
2. cDNA第二链合成: 可通过两种
方法
,一种是利用cDNA第一链的发夹环作为引物,另一种是RNase H修饰法保留mRNA5'端的顺序。3. cDNA甲基化: 是对
合成的cDNA
进行必要的修饰,可能影响其功能和稳定性。4. 接头连接: cDNA与载体DNA的连接,
使用
末端转移酶、Klenow片段或粘性末端连接技术完成。5. 分离...
cDNA
文库构建的
方法
与过程分别是
什么
?
答:
mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合.经典 cDNA 文库构建的基本原理是
用
Oligo(dT) 作逆转录引物,或者用随机引物,给所
合成的 cDNA
加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库.其基本步骤包括:RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,...
可以从基因文库中获得目的基因,则
合成cDNA
的过程中,反应体系内加入的物...
答:
2). 双链
cDNA 的合成
:
合成 cDNA
第二条链有两种方法。一种方法是利用 cDNA 第一链的 3' 末端常常出现发夹环的特征,这种发夹结构是反转录酶在第一链末端“返折”并且进行复制第一链的结果,它为合成 cDNA 第二链提供了有
用
的引物。用这种
方法合成
的双链 cDNA 在一端有一个发夹环,可以用...
cDNA文库
的cDNA
答:
15分钟灭活反转录酶.2.
cDNA
第二链的
合成
1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测。其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer6ul 10mM dNTP(自己配制)xul dd H2O1ul RNase H(2U/ul)10ul DNA Polymerase I(10U/ul)...
基因
合成
的
方法
有
哪些
?
答:
1. 反向转录法:通过提取mRNA,利用反转录酶
合成cDNA
,进而获得目的基因。2. 从细胞基因组直接分离法:直接从细胞中提取基因组DNA,通过特定的方法分离纯化目的基因。3. 人工化学
合成法
:通过化学
方法合成
目的基因的DNA序列,适用于合成已知序列的目的基因。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
什么方法合成cdna
cdna第二链合成
cdna合成体系
cdna的合成的原理和步骤
获取cdna的方法
cdna法合成目的基因的方法
cDNA第一链合成的方法
cdna合成体系及程序
cdna合成实验讨论