22问答网
所有问题
测序70bp左右老是出现类似酒精峰的大峰,导致信号较弱,请问怎么回事,是纯化不好吗,
但是有的样品同样的处理方法却没这种情况。我用的是乙醇-EDTA-NAAC方法纯化的,另外离心机要到达多大离心率才行,我用的离心机比较差
举报该问题
推荐答案 2008-10-17
大峰就是酒精峰
在70左右出现是正常的
原因是由于纯化的酒精没有挥发干净
一般测序都是用酒精醋酸钠纯化的
离心的时候一开始是3000RPM把PCR产物离到管底
看好是RPM,不是G
然后拿出来轻甩两下
将96孔板倒扣在摇篮上
当离心机达到275(最多300)RPM的时候迅速STOP
而且加速度调到4或者5(平时都是9)
这样转速是缓慢上去的
否则转速一下上去都来不及反应
最后在干燥机里至少干燥40分钟以上
注意就是甩的时候不要太用力
三四下就行
倒扣的时候转速一达到275立马就要停
不然PCR产物全出来了
最后就是干燥的时间稍长一点
我们用的是BECKMAN的离心机和3700XL测序仪
有的时候也会有这种情况
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
当前网址:
http://22.wendadaohang.com/zd/6fh2S6hC.html
其他回答
第1个回答 2008-10-17
测序一边前10—100个bp都会有杂乱,和测序机有关系,和纯化关系不大
第2个回答 2008-10-17
测序前后的两端的信号都很乱的,用不了的.看测序仪的好坏,200多bp都有可能.
如果是在序列中间,正常波峰突然变弱的话,有可能是连续一段C或G,GC过高~
相似回答
眼干,眼涩是
怎么回事
答:
眼干,眼涩可能得了干眼症
,干眼症是指由多种因素所导致的、以眼睛干涩为主要症状的泪液分泌障碍性眼病,常伴有双眼痒感、异物感、烧灼感,或畏光、视物模糊、视力波动等表现。常见之症状包括眼睛干涩、容易疲倦、眼痒、有异物感、痛灼热感、分泌物黏稠、怕风、畏光、对外界刺激很敏感;有时眼睛太干,基...
左耳经常耳鸣是
怎么回事
答:
病毒感染是引起本病的最常见的原因
。病毒感染循下述主要途径。1.血行感染 病毒颗粒由血循环直接进入内耳血循环内,引起耳蜗循环障碍或内淋巴迷路炎。2.经脑膜途径 病毒由蛛网膜下腔经内听道底的筛板或经蜗小管侵入外淋巴间隙引起外淋巴迷路炎,故耳蜗症状出现于脑膜炎之后。带状疱疹病毒是引起外淋巴迷...
大家正在搜
测序的峰图怎么做
测序结果为什么会出现套峰
测序重叠峰怎么办
基因测序峰图怎么看
测序出现套峰
测序出现重叠峰
sanger测序峰图怎么看
测序的峰图
基因测序峰图结果怎样比对