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蛋白质纯度检测方法
蛋白质纯度
的
测定方法
有哪些?
答:
双缩脲法(Biuret法):灵敏度低1~20mg
,中速20~30分钟
紫外吸收法
:较为灵敏50~100mg,快速5~10分钟
Folin-酚试剂法
(Lowry法):灵敏度高 5mg,40~60分钟,操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化 考马斯亮蓝法(Bradford法):灵敏度最高1~5mg,15分钟,常用 分子量测定:SDS-PAGE:还原SDS...
为什么标准
蛋白质
必须用凯氏定氮法
测定纯度
答:
首先,因为蛋白质当中含有氮,而且因为氮的含量与蛋白质的含量几乎呈线形相关,
所以标准蛋白质通常用凯氏定氮法测定纯度
。生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义,如蛋白质的含氮量约为16%,测出含氮量则可推知蛋白含量。生物材料总氮量的测定,通常采用微量凯氏定氮法。凯氏定氮法由于...
用什么进行
蛋白质纯度
的鉴定
答:
完成一个样品的
测定
,只需要5分钟左右。由于染料与
蛋白质
结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。(3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K 、Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、...
生物化学高频考点(十七)之
蛋白质
的含量
测定
与
纯度
的测定内容及思维导图...
答:
双缩脲法
,如同化学中的神秘魔法,尿素加热的产物与硫酸铜在碱性溶液中交织出红紫色的交响曲,揭示了肽键的存在,是定性和定量测定蛋白质的利器,尤其是在540nm的比色台上,它如同一把精确的尺子。 黄色反应,含有酪氨酸和色氨酸的蛋白质在硝酸的催化下,仿佛被赋予了色彩,从白色沉淀的初见,到加热...
如何用HPLC进行
蛋白质纯度检测
及含量测定?或测相对分子量?
答:
含量测定:用蛋白质标样配制一系列不同浓度的蛋白质溶液
,绘制蛋白质浓度与峰高/峰面积相关的标准曲线,再在相同条件下测位置样品的峰高/峰面积,即可得未知样品的浓度;纯度测定:保证待测样品中所有组份均出峰的情况下,用目标蛋白的峰面积/峰高除以所有峰峰面积/峰高的总和即可的目标蛋白的纯度。
为什么标准
蛋白质
必须用凯氏定氮法
测定纯度
答:
首先,因为蛋白质当中含有氮,而且因为氮的含量与蛋白质的含量几乎呈线形相关,
所以标准蛋白质通常用凯氏定氮法测定纯度
。生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义,如蛋白质的含氮量约为16%,测出含氮量则可推知蛋白含量。生物材料总氮量的测定,通常采用微量凯氏定氮法。凯氏定氮法由于...
鉴定
蛋白质
纯化产品的
纯度
,有哪些常用
方法
答:
常用色谱法,通过标准品对照图谱进行,分析包括分子筛(大小)、亲和层析(特异性结合)、离子交换(带电性)、疏水(水溶性);或是沉淀法,包括等电点沉淀、差速离子心沉淀、盐析沉淀、亲和沉淀;透析超滤法;电泳法。这些法说不上常不常用 ,都是根据要分析的
蛋白
性质决定的。
蛋白质纯度
鉴定的
方法
有哪些?
答:
电泳,蛋白质电泳 现在常用就是 SDS 聚丙乙烯酰胺凝胶电泳 特点 1)灵敏度高 2)
测定
快速、简便 3)干扰物质少 液相色谱 高效液相色谱是完全可以纯化蛋白质并且进行
蛋白质纯度
鉴定的 但建议还是使用蛋白质电泳 最主流 最有效的
方法
如何利用SDS-PAGE判定
蛋白质
的
纯度
和分子量
答:
SDS-PAGE判定
蛋白质
的
纯度
:若该蛋白质是单肽链蛋白质,则电泳得到的只有一条蛋白带(两条色带:一条为溴酚蓝,一条为蛋白带);若得出多条电泳带,则应该用非SDS-PAGE进行电泳,得出单一蛋白带则为单一蛋白质 SDS-PAGE判定蛋白质的分子量:定义:R=de/do R为迁移率,de为蛋白质电泳迁移距离,do...
测定蛋白质纯度
的
方法
,蛋白质纯度与一般化学试剂纯度有何不同
答:
蛋白质
?用盐析法提纯,蛋白质溶解度本来就不高加点相应的盐就析出了,然后再过滤,得到的晶体或不容物就是所要的蛋白质。
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