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cdna第二链的合成
从RNA抽提到制成
cDNA的
全过程
答:
2). 双链 cDNA
的合成
合成 cDNA 第二条链有两种方法。一种方法是利用 cDNA 第一
链的
3' 末端常常出现发夹环的特征,这种发夹结构是反转录酶在第一链末端“返折”并且进行复制第一链的结果,它为合成
cDNA 第二链
提供了有用的引物。用这种方法合成的双链 cDNA 在一端有一个发夹环,可以用单...
cDNA
文库的原理
答:
经典cDNA文库构建的基本原理:用Oligo(dT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所
合成的
cDNA 加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得cDNA文库。其基本步骤包括:(1)mRNA的提纯获取高质量的mRNA是构建高质量的cDNA文库的关键步骤之一。(2)cDNA第一条
链的合成
。(3)
cDNA第二
条链的合成。(4)双...
DNA测序可以采用哪些手段,并阐述各自的原理
答:
ddATP会随机地代替dATP参加反应一旦ddATP加入了新
合成的
DNA
链
, 由于其3位的羟基变成了氢, 所以不能继续延伸. 所以第一个反应中所产生的DNA链都是到A就终止了; 同理
第二
个反应产生的都是以C结尾的; 第三个反应的都以G结尾, 第四个反应的都以T结尾, 电泳后就可以读出序列了. 也许这样说你不一定...
如何证明是否mRNA反转录
cDNA第
一
链
成功
答:
takara rr037a反转录试剂盒反转录出来的是单链cDNA还是双链cDNA? 是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外操作:一、
cDNA第二链的合成
:1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中储存,待电泳检测。其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer ...
如何使用DNAMAN去确定引物在基因序列上结合的位置
答:
在创口上部菜单栏中找到有search 功能的按键,会弹出一个小文本框窗口,输入你的引物序列,然后让它寻找(search)。但是要注意引物有正义链与反义链输入的区别。不知道你的引物是普通的25个碱基,还是30个碱基以上的超长引物。后者引物可以用alignment(比对)试试。不过也要注意正义、反义
链的
输入。
RT-PCR中合成第一
链cDNA
为什么可以进行PCR,难道不需要
合成第二链
吗
答:
RT-PCR中
合成第
一链cDNA为RNA和DNA组成的“杂双链”,在设计PCR的引物时候也是根据
cDNA第
一链设计的,因此将第一链cDNA可以用来PCR。
第二链
cDNA是在第一
链cDNA的
基础上使用RNAase将RNA消化,利用百度百科上的几种方法合成与第一链cDNA互补的第二链cDNA,此刻就是构成了真正的,不包含RNA的“双链cDNA...
单边PCR的概念
答:
首先,引物多设计了一个用于逆转录的基因特异引物GSP-RT;其次,在酶促反应中增加了逆转录和加尾步骤,即先用GSP-RT逆转录 mRNA获得第一链(-)
cDNA
后, 用脱氧核糖核酸末端转移酶和dATP在cDNA5’ 端加poly(A)尾,再用锚定引物
合成第二链
(+)cDNA,接下来与3’ RACE过程相同。用接头引物和位于延伸引物上游的基因...
怎样利用基因工程制药?
答:
2,cDNA第一链的合成 一般 mRNA都带有3'-polyA,所以可以用寡聚dT作为引物,在逆转录酶的催化下,开始cDNA链的合成.用放射性探针法检测.3,
cDNA第二链的合成
以cDNA第一链为模板合成第二链.4,cDNA克隆 用于cDNA克隆的载体有两类:质粒DNA和噬菌体.又将其分为表达型载体和非表达型载体.选用表达型载体...
置换
合成
法做探针的原理
答:
置换型荧光探针利用该方法设计的荧光探针是通过识别基团分别与荧光指示剂和被分析物结合能力的强弱来实现对被分析物的检测。利用第一链在反转录酶作用下产生的
cDNA
:mRNA杂交链不用碱变性,而是在dNTP存在下,利用RNA酶H在杂交链的mRNA链上造成切口和缺口,从而产生一系列RNA引物使之成为
合成第二链的
引物...
简介DNA聚合酶Ⅰ和Klenow大片段的结构与功能。
答:
Klenow大片段是用蛋白酶水解DNA聚合酶Ⅰ所得的大片段区域,具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性,在基因工程中有广泛的应用,主要有:修复反应、制备平末端;标记DNA3'突出末端;双脱氧末端终止法进行DNA序列分析;用于
cDNA第二链的合成
;定点突变中用于合成第二链;用引物延伸法制备单链DNA...
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