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cdna第二链的合成
二代测序文库构建-概述与挑战(1)
答:
这种方法的明显优势在于第一
链cDNA
分子可以利用3端的唯一序列标签无需进行
第二链合成
,直接通过PCR进行扩增。5端唯一序列标签在第一链合成过程中引入。 用于
cDNA合成的
引物设计对于RNA-seq文库非常重要。比如,rRNA序列可以通过设计靶向rRNA的引物(不用于进一步扩增)进行去除。 NuGEN Ovation RNA-seq结合SPIA( Single ...
RNA转录为
cDNA的
试剂盒有哪几种,优缺点各是什么
答:
4.
cDNA第二链合成
的标准操作方法见:Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989) In: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 8.64.5. 总RNA中必须没有胍盐、多胺、亚精胺、焦磷酸盐、磷酸盐、金属离子、SDS...
构建
cDNA
文库时,RNA-DNA杂合链用核酸酶切后,在RNA上形成许多缺刻,并以...
答:
是这样的,核酸酶H切留许多引物在
cDNA
单
链
上,然后聚合酶补齐,引物切离,中间引物去掉之后都补齐了,5端还有一段,这时在双链3端加小尾巴之后(未端核苷酸转移酶),是不是要与载体结合保存起来备用,这时载体未端也被修饰可与之连接,那么5端那个口就可以载体3`羟为引物补齐。
病毒RNA的反转录步骤
答:
主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3′桹H末端上,按5′→3′方向,合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA(complementaryDNA,
cDNA
),它与RNA模板形成RNADNA杂交体。随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以cDNA为模板
合成第二
条DNA链。至此,完成由RNA指导的DNA合成过程。
高中生物老师
cDNA
可以理解为什么?是DNA-RNA的结合体还是双链DNA?
答:
cDNA
是双链DNA。在高中生物里可能是为了方便只提了第一步里的逆转录酶,事实上在整个制作步骤中,你可以看到由第一链产生
第二链的
过程中是需要DNA聚合酶的。不用在意这些,等大学里学到相关知识的时候会学到的。
RT-PCR中合成第一
链cDNA
为什么可以进行PCR,难道不需要
合成第二链
吗
答:
因为做PCR只要一条模版就够了 第一
链
被逆转录完成之后,通过其中一种引物可以结合聚合出互补链,接下来的过程就是普通的PCR的过程了 之所以在RT的过程中只
合成第
一链,因为RT过程是需要逆转录酶,工作温度37℃,同时使用的是随机引物或者是oligo-dT;而PCR过程使用高温DNA聚合酶,工作温度72℃,同时使用...
求Thermo的RevertAid First strand
cDNA
Synthesis kit试剂盒的中文说 ...
答:
这种情况下,只有带3’-poly(A)尾的mRNA是
cDNA合成的
模板。• 序列特异性引物:在引物结合位置。用这个系统合成的第一
链cDNA
可用做PCR*模板。因为cDNA合成和PCR的反应条件是一致的,所以cDNA反应混合物可直接加入PCR混合物。 合成的第一链cDNA也可用做
第二链合成
的模板。放射标记的DNA 可用做杂交探针。 带3’-...
哪里有
合成cDNA第二链的
试剂盒
答:
绝大多数构建
cDNA
文库的试剂盒都可以实现这个功能
RNA病毒的RNA如何逆转录成
cDNA
答:
图片来源于百度百科-逆转录 逆转录酶的作用是以dNTP为底物,以RNA为模板,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3'-末端上,按5'→3'方向,合成一条与RNA模板互补的
cDNA
单链,它与RNA模板形成RNA-cDNA杂交体。随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以
cDNA
为模板
合成第二
条DNA链。至此,完成...
cdna第
一
链合成的
基本策略
答:
4、洗涤凝胶以去除未结合的引物和酶,然后进行凝胶电泳以确认
第二链的
大小。将第二链从凝胶中切割下来,然后进行凝胶电泳以确认其大小。5、将第二链从凝胶中切割下来,加入DNA酶I、缓冲液和dNTPs,以
合成cDNA
的完整双链。洗涤凝胶以去除未结合的引物和酶,然后进行凝胶电泳以确认完整双链的大小。
cDNA第
...
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