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cdna第二链的合成
RNA逆转录生成的是双链DNA吗?为什么?
答:
2
、逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板
合成
DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。是RNA病毒的复制形式,需逆转录酶的催化。3、过程:先是以RNA为模版,在逆转录酶的作用下合成与其碱基互补配对的DNA单
链
,然后再以DNA单链为模版在DNA聚合酶的作用下继续合成双链DNA。4、逆转录是RNA病毒的复制...
逆转录酶和反转录酶有什么不同吗?
答:
→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。RNase H活性;由反转录酶催化
合成的cDNA
与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再
合成第二
条DNA分子。
什么是逆转录
答:
逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板
合成
DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。此过程中,核酸合成与转录(DNA到RNA)过程与遗传信息的流动方向(RNA到DNA)相反,故称为逆转录。逆转录过程是病毒的复制形式之一,如RNA病毒中的逆转录病毒,DNA病毒中的嗜肝DNA病毒和花椰菜花叶病病毒的复制均需要...
逆转录酶和反转录酶有什么不同吗?
答:
反转录酶跟逆转录酶是一个概念,只是翻译不一样而已。反转录酶(Reversetranscripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸
合成
互补DNA(
cDNA
)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反...
逆转录酶的三个功能
答:
→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。RNase H活性;由反转录酶催化
合成的cDNA
与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再
合成第二
条DNA分子。
CDNA
如何克隆
答:
在细胞中有两种状态,一是“紧密型”;二是“松驰型”。此外还应具有分子量小,易转化,有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段,适用于构建原核生物基因文库,
cDNA
库和次级克隆。②噬菌体DNA:常用的λ噬菌体的DNA是双链,长约49kb,约含50个基因,其中50%的基因对噬菌...
转基因工程在大肠杆菌中得到的胰岛素是不是还需要体外空间结构加工...
答:
在实验室中将人胰岛素基因A、B
链的
人工
合成
基因分别组合到E.coli的不同质粒上,然后再移至菌体内,着种重组质粒在E.coli细胞内进行正常的复制和表达,从而使带有A、B链基因的工程菌株分别产生人胰岛素A、B链,然后再用人工的方法,在体外通过二硫键使这
2
条链连接成有活性的人胰岛素。
逆转录酶的功能
答:
→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。RNase H活性;由反转录酶催化
合成的cDNA
与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再
合成第二
条DNA分子。
简述DNA重组与分子克隆化基本原理与过程
答:
外源DNA片段和线状质粒载体的连接,也就是在双
链
DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸,可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化,则吸能形成
2
个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口(图1.8),当杂本导入感受态细胞后可被修复...
如何进行目的基因和目的的
cDNA的
筛选?
答:
(四)用逆转录酶制备cDNA 大多数的目的基因是由mRNA
合成cDNA
(反转录DNA)得到。从RNA入手,先从细胞提取总RNA,然后根据大多数真核mRNA含有多聚腺嘌呤(polyadenylic acid ,polyA)尾的特点,用寡聚dT纤维素柱将mRNA分离出,以mRNA为模板,在多聚A尾上结合12-18个dT的寡聚dT片段,作为合适的起始...
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