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计算蛋白条带的纯度
Western blot的结果可不可以送去做
蛋白
测序?
答:
Western blot转膜后的蛋白质是不可以进行蛋白质谱测序的。但是可以根据western blot结果对照SDS-PAGE胶,找出SDS-PAGE胶上相应
蛋白条带的
位置,再把蛋白胶条切下来进行质谱鉴定。另外,如果蛋白量足够大,
纯度
足够高的话,可以直接将PVDF膜上的蛋白条带剪下来进行N端edman测序。但是edman测序最多检测N端20...
说明常用
蛋白质
测定方法的原理,并对各种方法加以比较
答:
出现沉淀,过滤除去。每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与
蛋白质
结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min。根据标准曲线
计算
待测样本的浓度。参考资料来源:百度百科-蛋白质测定 参考资料来源:百度百科-考马斯亮蓝法 ...
请问提取
蛋白质
以后
纯度
鉴定如何进行?具体步骤最好
答:
可以测它的吸光度值(OD值),或加入酶制剂,利用米氏方程
计算
。
如何利用OD260:OD280比值鉴定
蛋白纯度
是否被核酸污染?
答:
当
蛋白
中掺入了核酸之 后,OD260:OD280比值变化很明显,尤其是纯的蛋白制品中掺入了一点点核酸后,变化最明显.例如:纯的蛋白样品,其OD260:OD280比值为 0.57,而掺入5%的核酸之后,该笔直上升到了1.06.但是反过来却是不成立的,即:这个比值不能用来指示核酸被蛋白污染的程度.因为核酸在260nm和280...
如何判断提取质粒DNA
的纯度
答:
可以通过紫外吸收检测。因为核酸的最大吸收波长为260nm,
蛋白质
为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来
计算
核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm得OD值的比值,估计核酸
的纯度
。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1....
测定
蛋白质纯度
的方法,蛋白质纯度与一般化学试剂纯度有何不同
答:
蛋白质
?用盐析法提纯,蛋白质溶解度本来就不高加点相应的盐就析出了,然后再过滤,得到的晶体或不容物就是所要的蛋白质。
蛋白质
含量 每100克含14 现在想添加蛋白质到25,请问需要加多少
纯度
100%...
答:
100%蛋白质与14%
蛋白质的
质量比(25-14)/(100-25)=11/75 例如现有500克14%的蛋白质,要得到25%的蛋白质,需要加100%蛋白质的质量是 500×11/75=73.33克
如何测量RNA浓度
答:
可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。2、也可以用RNA胶(凝胶成像)检测。例如:原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的
条带
。凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:结合了
蛋白的
RNA...
一般用western blot法来检测水通道
蛋白的
话上样量多少
答:
看你的
蛋白
样品是
纯度
很高的单一条带样品还是未经纯化较多杂带的样品.如果是单一
条带的
样品10微克的上样量就足够了,如果是细胞裂解液这样的样品可以提高一些上样量30~80微克的样子.Western-blot的理论检出限很低,可以低至皮克级,但是实际应用还需要考虑抗体的效价等影响因素.
电泳法分离混合
蛋白质的
基本原理是什么
答:
大多数蛋白质在低温下比较稳定,因此
蛋白质的
分级分离操作一般都在0℃或更低的温度下进行。 (三)根据电荷不同 根据蛋白质的电荷不同即酸碱性质不同分离蛋白质混合物的方法有电泳和离子交换层析两类。 1、电泳:在外电场的作用下,带点颗粒将向着与其电性相反的电极移动,这种现象称为电泳。电泳技术可用于氨基酸、肽...
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